疏风解毒胶囊对流感病毒性肺炎病理损伤修复作用的生物学机制研究

Based on the study of influenza virus infection caused by pathological link, using normal mouse model and hypoimmune mice pneumonia model of influenza A virus infection, methodology in histopathology, confocal laser scanning technology, liquid chip technology, real time RT-PCR technology, bioinformatics method, dynamic observation of viral pneumonia in animal disease, virus load, histopathology, injury and regeneration of alveolar epithelial cells, the expression of inflammatory factors, the change regularity of miRNA control network in pathological injury, and on the basis of the whole organization, cell, molecule and gene level evaluation system of Chinese herbal compound Shufengjiedu Capsule on the virus causes pathological damage. Develop repair mechanism the corresponding treatment plan for different immune status, establish the mechanism of Chinese herbal compound in the treatment of viral diseases research methods to provide ideas and research foundation.

本研究立足流感病毒感染所致病理损伤环节，提出“影响TLR4-NF-κB激活介导的信号反应途径可能是疏风解毒胶囊抗病理损伤效应的途径之一”，“调控miRNA可能是其修复病理损伤效应的途径之一”的科学假说。采用Real Time RT-PCR技术、蛋白印迹方法、免疫荧光技术、激光扫描共聚焦技术、液相芯片技术、miRNA芯片测序技术、生物信息学技术等方法，观察甲型流感病毒感染正常小鼠和免疫低下小鼠肺炎模型肺组织病理形态、肺组织中病毒载量、TLR4活性、NF-κB活性、细胞因子表达量、MMP-9、T1-α和血栓调节蛋白表达、miRNA表达谱分析、肺泡上皮细胞结构与SP-C和PCNA表达的变化。研究将从病毒到宿主，从整体到组织、细胞、分子、基因水平阐明病毒感染致病理损伤的生物学机制，并在此基础上探讨疏风解毒胶囊的抗病毒作用机理。

本研究立足流感病毒感染所致病理损伤环节，评价疏风解毒胶囊对流感病毒感染性肺炎的治疗作用、探讨改善流感病毒感染导致肺组织病理损伤的作用机制、以及病理损伤后促进组织修复和再生的作用机制。研究采用甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠肺炎模型，从肺指数及抑制率、肺组织病理改变、肺组织病毒载量3个方面，观察疏风解毒胶囊对小鼠流感病毒感染性肺炎的治疗作用；从肺组织炎性因子表达、肺组织中MMP-9表达、血栓调节蛋白表达、NF-κB活性、TLR4表达、外周血常规、全肺组织的免疫细胞亚群百分比、肺组织切片中的免疫细胞亚群定位和百分比8个方面，研究减轻肺组织病理损伤的作用机制；从肺组织II型肺泡上皮细胞特异性标志物表面活性蛋白（SP-C）、分裂细胞标志物增殖细胞核抗原（PCNA）的表达、以及miRNA表达谱的改变3个方面，研究促进肺损伤后组织修复和再生的作用机制。结果提示，疏风解毒胶囊对甲型H1N1流感病毒PR8株感染具有治疗作用，可以显著改善流感病毒感染导致的肺组织病理损伤。疏风解毒胶囊可能通过抑制TLR4-NF-κB介导的炎症通路级联反应、降低巨噬细胞为主的固有免疫细胞比例、升高适应性免疫细胞比例，从而抑制流感病毒感染引起的炎症风暴、抑制肺泡上皮细胞损害，进而减轻肺组织病理损伤。疏风解毒胶囊可能通过适度调控miRNAs（miR-21和let-7）表达，促进肺泡上皮细胞新生，从而发挥组织修复作用。