银翘散提取物对流感病毒感染诱导激活的NF-κB和Raf/MEK/ERK信号途径的影响研究

流感病毒感染致病涉及病毒与机体两个复杂生物系统及其二者间的相互作用。流感病毒激活的宿主NF-κB和Raf/MEK/ERK信号途径在病毒复制和细胞因子分泌中发挥着重要作用。本课题以NF-κB和Raf/MEK/ERK信号途径为切入点，采用real time RT-PCR技术、western blotting方法、免疫荧光技术、液相芯片技术，观察甲型流感病毒感染A549、AECs细胞模型和小鼠流感病毒感染模型肺泡灌洗液中病毒载量、NF-κB活性、ERK活性、细胞因子表达量、病毒RNP蛋白的变化，从细胞、分子、基因水平阐明病毒感染的生物学机制，并在此基础上探讨中药银翘散水煎剂及其黄酮类和木脂素类有效部位的抗病毒作用机理。为寻找有效的抗病毒新靶标、分析银翘散抗病毒作用的药效物质基础、揭示中药整体调节的抗病毒机理、开辟治疗的新途径提供依据。

1 研究目的：流感病毒感染致病涉及病毒与机体两个复杂生物系统及其二者间的相互作用。流感病毒激活的宿主NF-κB和Raf/MEK/ERK信号途径在病毒复制和细胞因子分泌中发挥着重要作用。本课题以NF-κB和Raf/MEK/ERK信号途径为切入点，观察甲型流感病毒感染细胞模型和小鼠流感病毒感染模型肺组织中的病毒载量、NF-κB活性、ERK活性、细胞因子表达量的变化，从细胞、分子、基因水平阐明病毒感染的生物学机制，并在此基础上探讨中药复方银翘散提取物的抗病毒作用机理。本课题的完成对在分子水平上了解病毒和宿主的相互作用以及研究中医药治疗病毒感染性疾病的分子机制具有重要意义。为寻找有效的抗病毒药物，揭示中药整体调节的抗病毒机理、开辟治疗的新途径提供依据。.2 实验方法：本研究分为体内实验和体外实验，受试物为化学方法提取分离的银翘散水提物和有效部位，研究采用real time RT-PCR技术、western blotting方法、免疫荧光技术、液相芯片技术，多时间点动态观察甲型流感病毒PR8株感染小鼠模型和A549细胞模型病毒载量、NF-κB活化、ERK活性、细胞因子表达量的变化。.3 实验结果：研究结果显示，银翘散提取物可以降低模型小鼠的肺指数和病毒载量以及A549细胞的病毒载量，银翘散提取物可以降低体内外流感病毒感染模型的ERK磷酸化水平，可抑制NF-κB的活化，可以降低流感病毒感染诱导的KC/IL-8，IL-6，RANTES，TNF-α和MCP-1细胞因子表达。.4 实验结论：银翘散提取物可能通过抑制Raf/MEK/ERK和NF-κB信号通路，发挥抗病毒作用，同时下调KC/IL-8，IL-6，MCP-1，RANTES和TNF-α细胞因子的表达。.5 研究成果：通过本研究的实施，发表国内核心期刊文章1篇，获得国内发明专利1项，并参加国内外学术交流2次。