Cdk5在视网膜色素变性发病中的作用及干预的动物实验研究

视网膜色素变性(RP)是一种常见的遗传性致盲性眼病。目前尚无有效的治疗方法。研究表明光感受器细胞的凋亡在各种类型RP的发病机制中起主要作用。周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)及其激活蛋白p35与神经元正常功能的维持密切相关。在某些病理因素下，p35裂解为p25形成的Cdk5/p25复合物具有神经毒性，可导致tau蛋白异常磷酸化，诱发细胞凋亡。Cdk5/p25的活性在神经退行性疾病发病中起着重要的作用。前期研究发现RP可能与神经退行性疾病有着共同的病理生理机制。本研究通过检测p25在视网膜变性大鼠视网膜中的表达及Cdk5/p25的活性与视网膜光感受器细胞凋亡的相关性，探讨Cdk5/p25活性介导的光感受器细胞凋亡在RP发病中的作用。并通过Cdk5的抑制剂Roscovitine干预性治疗，观察其对视网膜色素变性过程的影响及其对光感受器细胞的保护作用。进一步阐述RP发病机制及探寻RP治疗的新途径

研究背景：视网膜色素变性(RP)是一种常见的遗传性致盲性眼病。目前尚无有效的治疗方法。研究表明光感受器细胞的凋亡在各种类型RP的发病机制中起主要作用。周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)及其激活蛋白p35与神经元正常功能的维持密切相关。在某些病理因素下，p35裂解为p25形成的Cdk5/p25复合物具有神经毒性，可导致tau蛋白异常磷酸化，诱发细胞凋亡。Cdk5/p25的活性在神经退行性疾病发病中起着重要的作用。前期研究发现RP可能与神经退行性疾病有着共同的病理生理机制。.主要研究内容：本研究采用免疫组织化学染色法、Western blotting、Cdk5活性测定法、TUNEL法，检测Cdk5、p25在视网膜变性大鼠视网膜中的表达及Cdk5/p25的活性与视网膜光感受器细胞凋亡的相关性，明确Cdk5/p25活性在光感受器细胞凋亡中的作用。并通过 Cdk5的抑制剂Roscovitine的干预性治疗，观察r o s c o v i t i n e对视网膜色素变性过程的影响及其对光感受器细胞的保护作用。.重要结果和关键数据：关于Cdk、p25的活性与视网膜光感受器细胞凋亡的相关性的研究发现: (1) RCS大鼠视网膜组织中Cdk5/P25激酶活性与P25蛋白表达水平和tau蛋白磷酸化水平基本一致，提示P25表达增加可能诱导了Cdk5/P25激酶活性升高，并通过磷酸化其作用底物引起视网膜神经细胞凋亡。过度激活的Cdk5/P25可能是引起视网膜色素变性光感受器细胞凋亡的新途径。(2) RCS大鼠视网膜中凋亡阳性细胞变化趋势与Cdk5、p25和cleave-caspase3的表达基本一致，表明 RCS大鼠视网膜中光感受器细胞的凋亡与Cdk5 、p25的表达水平升高有关，Cdk5参与了RCS大鼠视网膜色素变性的发生与发展。.通过采用R o s c o v i t i n e干预性治疗视网膜色素变性动物的研究发现：（1）Roscovitine抑制RCS变性大鼠视网膜Cdk5/P25激酶活性及tau蛋白磷酸化水平，即提示内源性过量表达的P25/cdk5可能参与视网膜色素变性的过程，而P25/cdk5抑制剂Roscovitine对RCS变性大鼠视网膜变性过程有一定的作用。(2) 应用Roscovitine 进行干预后，发现Caspase3蛋白水平减低,外核层凋亡细胞减少,萎缩程度