嗜肝性乙型肝炎病毒转运载体及其评估

鉴于目前传统病毒载体因广泛细胞嗜性、整合特性等而带来的诸多安全隐患，本课题拟探索一种基于乙肝病毒的基因转运载体，预期靶向肝细胞用于肝相关疾病的基因治疗。该载体包括三质粒系统，其一是包含乙肝病毒表面抗原大蛋白的包膜载体；其二是含完整/截短聚合酶和核心蛋白的融合包装载体；其三是含有包装信号和外源基因EGFP或EGFP/HDV核酶的转运载体。通过筛选多种细胞系以确定HBV病毒转运载体的最佳稳定或是瞬时包装细胞系。三病毒载体系统通过包装细胞系所生产的包含有EGFP报告基因的病毒经滴度测定后，感染肝源细胞和不同来源的非肝源细胞以确定该病毒是否具有专嗜肝细胞靶向性。同时对其进行安全性评估以检测是否有可复制性病毒产生。在此基础上，采用该载体系统携带前期课题筛选的特异性针对HBV的反式HDV核酶靶位入肝细胞，检测对乙型肝炎病毒复制的抑制效果，评估该病毒载体系统是否存在细胞毒性和免疫反应等负作用。