从巨噬细胞表型对成纤维细胞表型状态的调节规律研究回阳生肌法促进慢性皮肤溃疡愈合机制

Chronic skin wound with Yin syndrome mostly developed into non-healing wound. Recent studies have shown that wound macrophage and fibroblasts dysfunction such as phenotypic transition is one of important reason of healing failure caused by persist inflammation.Macrophages secrete different products at different times of wound healing, adjusting the activities of fibroblasts, influence the outcome of wound healing. The former results showed that ‘Hui Yang Sheng Ji’ ointment t to some extent promoted fibroblast proliferation in vitro, induced transformation of M1 to M2-type macrophages,and promoted impaired wound healing by modulating macrophage phenotypic transition and ameliorating wound microenvironment. This program propose to CM of ‘Hui Yang Sheng Ji’ ointment , ‘Reinforcing Qi and Warming Yang’ and ‘Activating Blood and Dredging Meridian’ on macrophage co-cultured fibroblasts. Explore the possible effect of ‘Hui Yang Sheng Ji’ ointment, ‘Reinforcing Qi and Warming Yang’ and ‘Activating Blood and Dredging Meridian’ on macrophage phenotype transition.with respect to fibroblasts of proliferation, collagen synthesis and degradation, phenotype transition,and the pathway of transformation phenotype.Theses are used for integrative study of ‘syndrome, principle and efficiency’ to enrich TCM theory of ‘rescuing Yang and improving tissue regeneration’.

慢性皮肤溃疡（阴证）是慢性难愈性皮肤溃疡常见证型，研究表明，巨噬细胞及成纤维细胞表型转化障碍是导致慢性皮肤溃疡炎症持续存在及创面难以愈合的重要原因。巨噬细胞在创伤愈合不同时期分泌不同的产物，调节成纤维细胞的活动，影响创面愈合的结局。前期研究结果证实回阳生肌膏体外可在一定程度上促进成纤维细胞增殖，诱导M1型巨噬细胞向M2型转化，改善创面微环境、促进创面愈合。因此，本项目采用回阳生肌膏及益气温阳、活血通络拆方与M1型巨噬细胞作用后的上清液与成纤维细胞共培养的方法，探索回阳生肌膏及益气温阳、活血通络拆方调节巨噬细胞表型转化来影响成纤维细胞的增殖、胶原的合成和降解、表型的转化及通路的作用机制，从而阐明回阳生肌的作用靶点，提升回阳生肌法的科学内涵，为临床用药提供理论指导。

巨噬细胞及成纤维细胞表型转化障碍是导致慢性皮肤溃疡炎症持续存在及创面难以愈合的重要原因。巨噬细胞在创伤愈合不同时期分泌不同的产物，调节成纤维细胞的活动，影响创面愈合的结局。本项目采用回阳生肌膏及益气温阳、活血通络拆方与M1型巨噬细胞作用后的上清液与成纤维细胞共培养的方法，探索回阳生肌膏及益气温阳、活血通络拆方调节巨噬细胞表型转化来影响成纤维细胞的增殖、胶原的合成和降解、表型的转化及通路的作用机制，结果显示回阳生肌及其拆方可以活化静息状态的成纤维细胞，促进胶原（COL1A1和COL3A1）、α-SAM的表达，刺激炎症因子（CCL2、CCL7、IL-6）、基质金属蛋白酶（MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-14）及抑制剂TIMP-1的分泌及mRNA表达。成纤维细胞加入M1型巨噬细胞上清液后胶原（COL1A1和COL3A1）、α-SAM的表达降低，炎症因子（CCL2、CCL7、IL-6）、基质金属蛋白酶（MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-14）的分泌及mRNA表达迅速升高，抑制剂TIMP-1降低，而成纤维细胞加入回阳生肌及其拆方作用的M1型巨噬细胞上清液后，成纤维细胞胶原（COL1A1和COL3A1）、α-SAM的表达均升高，炎症因子（CCL2、CCL7、IL-6）、基质金属蛋白酶（MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-14）的分泌及mRNA表达降低, TIMP-1的分泌及mRNA表达升高。与M1型上清液相比，回阳生肌及其拆方对HSF细胞Smad3、 c-Jun的蛋白表达水平基本无影响，pSmad3、 pc-Jun的蛋白表达水平升高，c-Fos蛋白表达水平降低。提示回阳生肌及其拆方可能通过Smad3/c-Jun通路促使成纤维细胞向肌成纤维细胞转化，从而提高 Fb 的细胞外基质合成和细胞收缩的功能，促进创面愈合。.在慢性创面中，以益气温阳为特点的回阳生肌法，可通过温煦扶助阳气，以提升巨噬细胞表型转化功能，回阳生肌及其拆方可能通过诱导M 1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化，来改变创面的微环境，激发成纤维细胞修复能力 ，促进成纤维细胞增殖、胶原合成及向肌成纤维细胞转化，从而发挥促愈合作用。本研究阐明回阳生肌的作用靶点，提升回阳生肌法的科学内涵，为临床用药提供了理论指导。