基于AMPA受体"胞吐-内化"稳态平衡探讨益肾化浊法调控海马突触传递效能改善AD记忆障碍机制研究

Memory impairment which is closely related to synaptic transmission efficacy is the primary clinical manifestations of Alzheimer's disease. The project proposes to do further research about enhancing synaptic transmission efficacy from regulating homeostasis of AMPA receptor "exocytosis - internalization", which is based on yishenhuazhuofa improving cognitive function in patients with AD and regulating Ca2 + signal network then awakening silence synapses. Adopt AD rats model as objects and yishenhuazhuofa as interventions. Detect AD rats model's capacity of new memories forming and stored. Observe hippocampal synaptic ultrastructure morphological changing, the expressive quantities of GluR1 and GluR2 receptor in the postsynaptic membrane of hippocampal synapses. Detect the activated expression of key factors during the process of AMPA receptor "exocytosis-internalization" cycle. These above can be implemented by the way of animal behavior, morphological, immunoprecipitation and molecular biology etc. Explore whether yishenhuazhuofa can regulate the cycle pathway that considers AMPA receptor as central part or enhance synaptic transmission efficacy, improve the pathway and targets of AD model's cognitive function via the levels of behavior, cells, molecules. Provide support for the development of "kidney stores essential ,the brain is sea of marrow" theory and experimental evidence for the treatment of AD via the "theory of governance from the kidney".

记忆障碍是阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD）的首要临床表现，突触传递的效能与记忆障碍的发生关系密切。本课题在前期益肾化浊法改善AD患者认知功能、调控AD大鼠Ca2+信号网络唤醒沉默突触的基础上，拟从调控AMPA受体"胞吐-内化"稳态平衡，增强突触传递效能方面做进一步深入研究。拟采用AD大鼠为研究对象，以益肾化浊法为干预手段，通过动物行为学、组织形态学、免疫共沉淀及分子生物学等方法观察AD大鼠新记忆形成与储存能力、海马突触超微结构形态学变化、海马中GluR1和GluR2受体在突触后膜与突触内的表达量、海马AMPA受体胞吐与内化循环过程及各关键因子的活化表达等，从行为、细胞、分子不同层次探讨益肾化浊法调控以AMPA受体为中心环节的循环途径，增强突触传递效能，改善AD大鼠认知功能的作用途径与靶点，为发展"肾藏精、脑为髓之海"理论提供支撑，为"从肾论治"AD提供实验依据。

阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD）是一种临床常见的中枢神经系统退行性疾病，已成为21世纪威胁人类健康的最严重疾病之一，其发病机制与大脑海马区神经元减少，突触传递效能下降密切相关。本课题前期研究发现益肾化浊法中药组方能改善AD患者认知功能，该作用与调控AD模型大鼠Ca2+信号网络增加突触可塑性有关。AMPA受体在研究突触可塑性中具有不可或缺的作用，其亚型GluR1和GluR2均在AMPA受体的胞吐和内化中具有重要作用，其中GluR1为主导的AMPA胞吐-内化过程可加强突触传递效能，而以GluR2为主导的胞吐-内化过程则会削弱突触传递效能。.基于此，本研究选取7月龄SAMP8小鼠为研究对象，以益肾化浊方为干预手段，通过动物行为学、组织形态学、电生理学及分子生物学等检测，观察突触后膜AMPA受体亚型GluR1、GluR2的表达，同时观察AMPA受体胞吐-内化过程中各关键分子的活化情况，结合SAMP8小鼠空间学习记忆能力、海马神经元突触微观形态的变化，以及在体海马区LTP、DEP的诱导与维持情况等，从行为、细胞、分子不同层次探讨益肾化浊方分别调节以GluR1和GluR2为主导的AMPA受体胞吐-内化的稳态平衡，初步阐明其增强突触传递效能的作用途径与靶点，探索中医药改善学习记忆能力减退的作用机理。.通过上述工作得出以下研究结论：（1）益肾化浊方具有改善SAMP8小鼠学习记忆能力，保护海马区神经元形态的作用。（2）益肾化浊方具有改善SAMP8小鼠海马区神经元、突触超微结构、突触功能可塑性和AMPA受体亚型GluR1、GluR2分布的作用。（3）益肾化浊方改善SAMP8小鼠学习记忆能力减退可能是通过影响AMPA受体循环过程中关键分子，从而调节海马区GluR1和GluR2介导的AMPA受体胞吐-内化过程，进而改善SAMP8小鼠的突触传递效能。上述结论部分证明了项目假说。.通过上述研究探索了益肾化浊方调控以AMPA受体为中心环节稳态平衡、增强突触传递效能，改善SAMP8小鼠学习记忆能力减退的作用途径与靶点，为发展“肾藏精、脑为髓之海”理论提供支撑，为“从肾论治”AD提供实验依据。