从调控JAK/STAT信号转导通路探讨益肾化浊法抑制神经干细胞向星形胶质细胞分化的作用机制

阿尔兹海默病（Alzheimer's disease, AD）为临床常见的中枢神经系统退行性疾病之一，其发病机制与脑内Aβ聚集后激活星形胶质细胞增生，释放炎症因子，导致神经元变性密切相关。本课题组前期实验研究发现补肾中药单体提取物齐墩果酸能明显抑制Aβ刺激后的神经干细胞向星形胶质细胞的分化增生，进而减缓神经元损伤。在此基础上，本研究拟采用Aβ刺激神经干细胞建立细胞模型为观察对象，以益肾化浊法中药为干预手段，通过微观形态学与分子生物学检测方法，观察细胞模型活性和GFAP表达的变化，观察参与神经干细胞向星形胶质细胞分化过程JAK/STAT信号转导通路中关键环节gp130、STAT3 、Smad1、ngn1和 GFAP蛋白和基因的表达变化，以期探讨益肾化浊法通过抑制神经干细胞向星形胶质细胞分化来缓解AD发展的部分作用机制，初步阐释该法减缓AD的作用机理，并为该法的临床应用提供部分实验依据。

本研究从孕14 d昆明小鼠体外提取并培养NSCs，建立分化系统中可溶性Aβ25-35 (5μmol.L-1)介导的具有神经毒性的AD细胞模型，与0.1μg/mL益肾化浊法中药共同孵育，分为对照组，模型组，益肾化浊中药组，分别采用Western Blot与RT-PCR法从分子生物学水平上观察益肾化浊法对JAK/STAT信号转导通路中关键靶点基因与蛋白表达的影响。RT-PCR检测结果显示Aβ组GFAP、STAT3、P-STAT3与对照组相比显著增加(P<0.05)，ngn1、Tubulin表达显著减少(P>0.05)，Smad1基因表达增加不明显(P>0.05)；与Aβ组相比，0.1µg/mL益肾化浊法中药组4个基因的表达均显著下降, ngn1、Tubulin表达显著增加(P>0.05)，差异具有统计学意义(P<0.05)；与Aβ组相比，0.1µg/mL益肾化浊法中药组四个基因的表达均显著下降, Tubulin表达显著增加(P>0.05)，差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot法检测GFAP、STAT3、P-STAT3、Smad1、ngn1、Tubulin蛋白的表达，以观察益肾化浊法中药对NSCs分化为星形胶质细胞过程中JAK/STAT信号通路的关键目标蛋白的影响，结果趋势与基因表达一致。. 根据实验结果我们得出以下结论：益肾化浊法具有促进Aβ25-35介导的NSCs向神经元分化、抑制其向星形胶质细胞分化的作用；益肾化浊法抑制Aβ25-35介导的NSCs向星形胶质细胞方向分化，其机制可能与JAK/STAT信号通路相关。本实验为益肾化浊法临床应用和推广提供了部分实验依据，同时将中医与现代生物学技术有机结合，借助干细胞分子生物学的技术来阐述中医基础理论和中药复方作用机制，探索通过中医药激活内源性NSCs以防治老年性痴呆寻找新的切入点，为揭示中医药在防治慢性退行性疾病内在规律相关科学研究提供积极借鉴。. 本课题已发表期刊论文4篇，5篇已收录待发表,1篇论文审稿中；培养博士研究生2名（1名已毕业，1名在读），硕士研究生2名（已毕业）。