从调控MMP-9活化途径探讨化痰通络法对急性脑梗死溶栓后出血转化的干预机制

出血转化是影响急性脑梗死临床疗效、限制溶栓疗法广泛开展最直接、最主要的原因之一，目前尚无有效干预手段，其机制与"神经血管单元"中核心结构- - 血脑屏障完整性破坏，特别是关键靶点MMP-9活化程度密切相关。本课题在前期临床研究发现化痰通络法具有减少急性脑梗死溶栓后出血转化发生趋势的基础上，拟采用MCAO大鼠为观察对象，以化痰通络法为干预手段,通过形态学、免疫组化、Western Blot与RT-PCR等检测手段，观察不同部位脑组织MMP-9不同活化途径中关键因子AP-1、NF-κB、MMP-3、TIMP-1的蛋白和基因表达；观察MMP-9及其前体pro-MMP-9蛋白表达和ZO1蛋白表达；观察血脑屏障通透性和血管内皮细胞微观形态的变化，以期阐明化痰通络法防治急性脑梗死溶栓后出血转化的作用途径与靶点，探索中医药对"神经血管单元"、特别对血脑屏障完整性的保护作用，为溶栓后出血转化治疗提供实验依据。

出血转化已经成为严重限制溶栓疗法广泛应用于急性脑梗死临床治疗的直接原因之一。本研究采用改良大脑中动脉栓塞（MCAO）模型大鼠为对象，以化痰通络法联合rt-PA溶栓为干预手段，通过神经功能量表评分、组织形态学、Western Blot与RT-PCR等检测手段，观察大鼠神经功能的变化、观察血脑屏障通透性和血管内皮细胞微观形态的变化；观察MMP-9及其前体pro-MMP-9的蛋白表达和ZO-1蛋白表达；观察不同部位脑组织中MMP-9不同激活途径中关键因子AP-1、NF-κB、MMP-3、TIMP-1的基因和蛋白表达。研究发现：1. 化痰通络法可明显降低急性脑梗死rt-PA溶栓大鼠神经功能损伤程度，并在一定程度上降低溶栓后脑出血及死亡等情况的发生。2. 化痰通络法能明显降低急性脑梗死rt-PA溶栓治疗后大鼠皮质的EB含量，降低血脑屏障通透性；并且溶栓后24h内应用高剂量中药，24h后至7d内应用中剂量中药治疗，其治疗效果优于单纯一种中药剂量的应用。3. 化痰通络法能明显保护急性脑梗死rt-PA溶栓治疗后BBB内皮细胞及海马CA1区神经元形态学完整性。4. 化痰通络法能明显降低急性脑梗死rt-PA溶栓治疗后不同脑组织中MMP-9的蛋白表达，增加ZO-1蛋白的表达，恢复血脑屏障完整性，降低缺血再灌注损伤，并且其作用存在一定的浓度依赖性。5. 化痰通络法可明显降低急性脑梗死rt-PA溶栓治疗后不同脑组织中AP-1、NF-κB基因和MMP-3蛋白与基因的表达，增加TIMP-1蛋白与基因的表达，从不同途径对MMP-9的活化进行部分抑制，并且其作用存在一定的浓度依赖性和时间依赖性。上述研究结果证实了化痰通络法通过多途径、多靶点调控MMP-9不同活化途径中关键靶点的作用机制及作用优势；为临床应用提供化痰通络法具有保护血脑屏障完整性，进而防治脑梗死溶栓后出血转化、死亡等并发症的实验依据；促进中药联合溶栓剂治疗急性脑梗死在临床上的应用和推广；推动中药对"神经血管单元"保护作用的研究。撰写高质量论文7篇，其中期刊论文5篇已发表，1篇已收录待发表，会议论文1篇已发表；全国性学术会议作专题报告2次；培养博士研究生1名（在读），硕士研究生3名（已毕业）；培养中青年学术带头人（40岁以下）1名。