白花檵木有效部位壳聚糖复合物防治糖尿病皮肤溃疡机理研究

Ddiabetic skin ulcer Can bot Be Prevented, gangrene that even amputated or disabled,is one of the difficult diseases to human health.In the previous study of our research group,we have proved effective the White flower of Loropetalum chinense and Chitosan Complex(WCC)can promote diabetes skin ulcer healing,and also can inhibit the rat models of skin ulcer occurred.Preliminary studies suggested WCC could improve the local wound blood circulation, adjust epidermal stem cells(ESCs) the microenvironment, reduce the proliferation of fibrous tissue and so on. This topic use ESCs for target, using Classic cell morphology and molecular biology techniques,focusing on the regulation and characteristics of Wnt and Bmp,whose signal transduction pathway of WCC on ESCs proliferation and differentiation, get protein expression and mutual restraint of the experimental data ,which belong to WCC intervention signal-regulated switch substance β- catetin and important signal material Bmp, analysis to promote the ESCs self-renewal and maintain stem cells in the resting and activation state of dynamic balance between the function,explore the molecular mechanism and effect relationship of WCC control diabetes skin ulcer thoroughly , screening new drugs of prevention and treatment of diabetic skin ulcers and provide the theoretical basis for clinical scientific medicine,and have scientific values and application prospects.

糖尿病皮肤溃疡久治不愈、溃烂坏疽以至截肢残废，是危害人类健康的临床难治病之一。本课题组的前期研究证明白花檵木有效部位与壳聚糖的复合物（WCC）具有促进糖尿病皮肤溃疡愈合的作用，又能抑制糖尿病模型大鼠皮肤溃疡发生。初步研究表明WCC具有改善创面局部血液循环，调整表皮干细胞(ESCs)微环境，减少纤维组织增生等作用。本课题以ESCs为靶标，采用经典细胞形态学与分子生物学技术，重点研究WCC作为一种信号物质，对ESCs增殖与分化的主要信号转导通路Wnt与Bmp的调控作用及其特点。以期获得WCC调节开关物质β-catetin与重要信号物质BMP蛋白的表达及相互制约的实验数据，分析WCC促进ESCs自我更新、维持干细胞静息态和活化态之间动态平衡的功能；获得WCC防治糖尿病皮肤溃疡的剂量依赖性实验数据，分析其量效关系。为有效筛选防治糖尿病皮肤溃疡新药和临床科学用药提供理论依据。

糖尿病皮肤溃疡久治不愈、溃烂坏疽以至截肢残废，是危害人类健康的临床难治病之一。本项目组的前期研究证明白花檵木有效部位与壳聚糖的复合物（Loropetalum chinensis-chitosan, LCC）具有促进糖尿病皮肤溃疡愈合的作用，又能抑制糖尿病模型大鼠皮肤溃疡发生。.本项目以ESCs为靶标，采用经典细胞形态学与分子生物学技术，重点研究LCC作为一种信号物质，对ESCs增殖与分化的主要信号转导通路Wnt与Bmp的调控作用及其特点。以期获得WCC调节开关物质β-catetin与重要信号物质WNT、β-catenin与C-myc等三种蛋白的表达及相互制约的实验数据，分析LCC促进ESCs自我更新、维持干细胞静息态和活化态之间动态平衡的功能；获得LCC防治糖尿病皮肤溃疡的剂量依赖性实验数据，分析其量效关系。.本项目研究白花檵木（Loropetalum chinensis）与壳聚糖（chitosan）复合物（LCC）治疗糖尿病皮肤溃疡的分子机制。4.5kg白花檵木的75%醇提物232.8g干粉，以多酚类物质为主要成分，其中黄酮类物质山奈酚含量最高130.6mg，植物单宁没食子酸含量为24.6 mg。经酶降解的水溶性壳聚糖相对分子量Mr ≤2000Da。制备LCC最佳比例为醇提物:水溶性壳聚糖=2:1（M/M）。以没食子酸与壳聚糖的含量作为控制LCC复合物的质量指标。采用体外表皮干细胞（epidermal stem cells，ESCs）培养技术与双荧光素酶报告基因检测系统研究LCC治疗糖尿病皮肤溃疡的分子机制。ESCs经不同剂量LCC（50µg•mL-1、100 µg•mL-1)）处理48h后，采用Western Blot技术证明与Wnt信号通路相关的WNT、β-catenin与C-myc等三种蛋白表达上调，且与LCC剂量呈正相关量效关系（P<0.01）。经双荧光素酶报告基因检测系统进一步鉴定了LCC对Wnt信号通路的靶向作用。表明LCC激活经典Wnt信号通路，促使β-catenin关键蛋白积累，进入细胞核内与转录因子LEF/TCF 结合，激活下游特异靶基因表达，促进ESCs增殖、分化，有效地修复糖尿病溃疡皮肤创面。为有效筛选防治糖尿病皮肤溃疡新药和临床科学用药提供理论依据。