Fbxw8对上皮间质转化（EMT）的调控及其在前列腺癌转移中的作用

文献报道，Cullin7依赖Cullin7-Fbxw8复合体的泛素连接酶活性诱导EMT。本研究结果显示，Fbxw8也可诱导前列腺癌(PC)细胞发生EMT,但机制不明。另有研究报道,Snail、Slug等转录因子能抑制E-cadherin转录并启动EMT；IRS-1是Cullin7-Fbxw8复合体的底物分子,可通过下调Snail,Slug表达而抑制EMT。本研究显示,过表达Fbxw8的PC3细胞E-cadherin、IRS-1表达均降低。因此,本研究拟在PC3细胞中过表达或抑制Fbxw8表达,证实Fbxw8 可通过上调转录因子表达,下调E-cadherin表达,促进EMT发生；或者Fbxw8可通过下调IRS-1表达，诱导Snail、Slug表达，抑制E-cadherin表达,促进EMT发生,进而提高PC细胞的侵袭能力；并在裸鼠体内和临床标本中验证。上述机制如能证实，将为PC治疗提供新的靶点

本研究采用前列腺癌细胞为研究对象，研究泛素E3连接酶Fbxw8对前列腺癌细胞EMT发生的诱导作用及其对前列腺癌细胞侵袭能力的影响；探讨Fbxw8及调控其表达的miR-3160-5P在TGF-β诱导前列腺癌细胞EMT发生中的作用；最后阐述Fbxw8、miR-3160-5P对前列腺癌细胞增殖功能的影响及其分子机制。本研究首先利用RT-PCR及western blotting技术检测Fbxw8及三种调控Fbxw8表达的候选microRNAs在前列腺癌细胞中的表达，并分析三种mircoRNAs表达与Fbxw8表达相关性。然后建立稳定下调及过表达Fbxw8的前列腺癌细胞系，利用倒置显微镜观察Fbxw8对细胞形态学的影响、Western blotting检测Fbxw8对前列腺癌细胞中E-Cadherin、Vimentin表达的影响、Matrigel侵袭实验检测细胞的侵袭能力。利用MTT实验测定Fbxw8及miR-3160-5P对前列腺癌细胞增殖活力的影响；流式细胞仪检测细胞周期分布情况；利用western blotting检测Fbxw8及miR-3160-5P对细胞周期相关蛋白表达的影响；MTT法检测同时下调Fbxw8及HPK1表达细胞的增殖能力。TGF-β分别处理前列腺癌细胞，靶向抑制Fbxw8表达细胞及转染miR-3160-5P的前列腺癌细胞，然后利用倒置显微镜观察Fbxw8对细胞形态学的影响、Western blotting检测细胞中Fbxw8、E-Cadherin、Vimentin、Snail表达的影响。以上实验结果表明，Fbxw8在前列腺细胞中广泛表达，提示Fbxw8可能在人前列腺癌细胞的生物学行为中发挥重要作用。Fbxw8可诱导前列腺癌细胞发生EMT，从而促进癌细胞侵袭能力。miR-3160-5P可靶向抑制Fbxw8的表达，并且二者均可在TGF-β诱导前列腺癌细胞EMT发生过程中发挥介导作用。Fbxw8可作为癌基因促进前列腺癌细胞增殖活性，HPK1可介导此过程。同时，miR-3160-5P可通过下调Fbxw8表达，进而调控细胞周期相关蛋白而抑制前列腺癌细胞的增殖能力。