补虚化瘀法对EAH小鼠Treg/Th17细胞功能异常调控作用的研究

在既往临床和实验研究证实"补虚化瘀法"组方的中药能有效改善自身免疫性肝炎（AIH）患者临床症状、体征和实验室指标，以及免疫性肝损伤小鼠模型的肝功能和组织病理学改变的基础上，本次研究将采用国内外公认、由同种系肝抗原联合完全弗氏佐剂诱导的实验性自身免疫性肝炎（EAH）小鼠模型，动态观察"补虚化瘀法"组方的中药对EAH模型小鼠生化指标、肝脏病理的改善作用，尤其是对T细胞功能的调节作用,其中包括调节性T淋巴细胞(Treg)/辅助性T淋巴细胞17(Th17)细胞数量及功能相关的IL-10、IL-17、TGF-β1水平和特异性转录因子Foxp3和RORγt的基因、蛋白表达等，从免疫学、分子生物学层次研究"补虚化瘀法"组方中药治疗AIH的作用机制，为开发新药奠定药理研究基础。同时研究Treg/Th17细胞平衡紊乱在AIH发病过程中的重要作用，探索AIH又一可能的发病机制。

自身免疫性肝炎（Autoimmune Hepatitis，AIH）是一类原因尚未明了、意见尚未完全统一的肝脏炎症性疾病。单用强的松或低剂量强的松联合硫唑嘌呤是目前AIH主要的治疗方法，但存在撤药复发，原发性治疗失败、药物副作用明显等弊端。AIH的发病机制比较复杂，它的发病可能与遗传、自身抗原、环境及免疫功能失调相关。近年来，研究认为Treg细胞及Th17细胞平衡失调是导致AIH发病的重要机制。中医药的辨证治疗补充了西药在AIH治疗上的缺陷，本项目通过建立AIH模型小鼠，以Treg/Th17平衡失调及影响Treg、Th17生成、增殖的细胞因子（TGF-β1、IL-10、IL-17）、转录因子（Foxp3、RORγt）为研究内容探讨AIH的发病机制，初步阐明“补虚化瘀”组方中药治疗AIH的作用环节，为新药开发提供依据。研究发现AIH模型小鼠存在明显的Treg/Th17平衡失调和细胞因子、转录因子表达异常，而“补虚化瘀”组方中药可降显著提高AIH模型小鼠肝组织Treg细胞转录因子Foxp3表达，降低Th17细胞转录因子RORγt表达同时减少RORγt mRNA含量；增加AIH模型小鼠肝组织内Treg细胞刺激因子IL-10含量，降低Th17细胞刺激因子IL-17含量，从而增加AIH模型小鼠肝组织淋巴细胞中Treg细胞数量，降低Th17细胞数量，恢复Treg/Th17平衡；达到降低AIH小鼠血清ALT、AST、AKP水平，改善肝组织炎症作用。部分阐明“补虚化瘀”组方中药治疗AIH物质基础。总之，通过研究证实运用“补虚化瘀法” 治疗AIH的中医治则具有创新性，为中药治疗自身免疫性肝炎提供理论依据。证实了Th17/Treg细胞平衡紊乱是AIH重要发病机制之一，具有创新性。