安普霉素生物合成基因的研究

利用大肠杆菌——链霉菌穿梭质粒pKC505为载体，构建了黑暗链霉菌基因文库。根据参与氨基糖苷类抗生素生物合成基因dTDP葡萄糖-4，6脱水酶基因的保守性设计引物，从黑暗链霉菌PCR得到同源性较高的DNA片段，测序分析得到—完整基因，由1132个核苷酸组成，其G+C含量为72%。该基因命名为aprE，已被Genebank收录，accession No.AF30687。利用鸟枪克隆法得到了安普霉素抗性基因，分离到了与之相连锁的大约15kb DNA片段。探索了黑暗链霉菌原生质体形成和再生的最佳条件。发现黑暗链霉菌有较强的限制和修饰系统，将外源DNA迅速降解。采用原生质体、电转化、接合转移等方法转化黑暗链霉菌，发现只有接合转移法能将质粒转入黑暗链菌。