鸡骨草黄酮碳苷类化合物的ALK5激酶抑制构效关系与作用机制研究

中药鸡骨草为相思子属植物鸡骨草Abrus cantoniensis Hance和毛鸡骨草Abrus mollis Hance的干燥全草, 在我国南方地区广泛分布,为传统治疗肝病的常用中药。本课题前期研究发现从毛鸡骨草中分离得到的黄酮碳苷具有显著的抗肝纤维化活性，体外试验证明该类成分具有明显的ALK5激酶抑制活性，为首次发现的天然药物来源的ALK5激酶抑制剂。ALK5激酶抑制为肝纤维化治疗的新型靶点，将阻断TGF-β信号转导中对肝纤维化的形成具有特异性作用的下游通路。本项目拟在前期研究工作基础上，进一步对相思子属植物鸡骨草及毛鸡骨草的黄酮碳苷类成分进行系统的分离及鉴定，评价该类化合物的ALK5激酶抑制活性及对肝星状细胞增殖及胶原合成的影响，并对该类化合物进行结构修饰研究，探讨黄酮碳苷类化合物ALK5激酶抑制构效关系与作用机制，为新型基于ALK5激酶抑制抗肝纤维化药物的研究开发提供科学依据。

中药鸡骨草为相思子属植物鸡骨草Abrus cantoniensis和毛鸡骨草Abrus mollis的干燥全草，为传统治疗肝病的常用中药。采用色谱及波谱方法从毛鸡骨草A. mollis分离鉴定了20个化合物，从鸡骨草A.cantoniensis分离鉴定了18个化合物，主要结构类型为黄酮碳苷、三萜皂苷及酪氨酸酰化物等，其中1个新化合物。采LanthaScreenTM方法对分离得到的单体化合物进行ALK5激酶抑制活性评价研究，发现本植物分离得到的黄酮碳苷类化合物具有较强的ALK5激酶抑制活性（1~ 25 μM)。基于文献报道 ALK5激酶功能区的晶体结构与药效团模型，本植物分离得到的黄酮碳苷类活性化合物进一步通过计算机虚拟分子对接的方法进行验证，提示6，8位双糖基取代黄酮碳苷类化合物ALK5激酶抑制活性明显强于6, 或8位单糖基取代黄酮碳苷。. 采用大鼠肝实质细胞体外肝损伤模型、LPS诱导的RAW264.7细胞体外抗炎模型、及油酸孵育的HepG2细胞体外降脂模型等考察3个主要黄酮碳苷及其活性组分（AME)的保肝、抗炎及降脂活性，发现上述黄酮碳苷活性化合物及活性组分具有保肝、抗炎、及降脂等多靶点药效活性。动物实验研究发现，AME具有显著的保肝抗炎、利胆降脂、及缓解肝纤维化等药效活性。AME可以促进肝脏脂肪酸的氧化，降低肝脏脂肪酸的合成，进而降低肝脏脂质蓄积；明显改善肝脏脂质蓄积伴有的炎症反应；通过调节胆汁酸合成关键酶及胆汁酸转运关键蛋白的表达而发挥其利胆作用，促进体内胆固醇的转化和消除。本课题进行AME组分中药的整合药动学探索研究，采用LC-MS技术检测AME大鼠口服给药后3个黄酮碳苷指标成分的血药曲线，结果表明，大鼠灌胃给药后，可迅速吸收入血，并呈现双峰药动学特征。采用双部位吸收药动学模型进行拟合，初步推测口服后药物在体内可能存在消化道双部位吸收机制。采用PKSolver软件进行整合药动学拟合计算，分别与利胆药效动物试验胆汁分泌达峰时间，及角叉菜胶大鼠足跖肿胀模型的有效抑制时间吻合，具有较好的时效相关性。以上研究显示，AME口服给药具有显著的降低血脂及肝脂蓄积、保肝降酶、缓解肝纤维化、利胆褪黄、及抗炎等药效活性，具有多组分、多靶点的天然药物作用特色。. 以上研究为揭示鸡骨草药效物质基础及黄酮碳苷类化合物的药物发现奠定研究基础。