温肾健脾法对IBS-D大鼠结肠黏膜、回盲部神经-内分泌-免疫网络的影响

腹泻型肠易激综合征（IBS-D）是最常见的肠道功能性疾病，发病率高达20% ，且呈逐年上升趋势。目前西医治疗缺乏有效手段，中医治疗经验丰富，优势显著。临床研究表明：温肾健脾法治疗IBS疗效好，副作用少，但其科学内涵亟待阐释。IBS发病机制不清楚，基础研究发现：多种胃肠激素、神经递质、免疫细胞如CCK、VIP、MOT、SP、MC及促炎因子/抗炎因子平衡（Th1/Th2）等均参与胃肠功能的生理病理调节。本研究项目提出假说：中医温肾健脾法治疗IBS-D主要是通过调节结肠黏膜、回盲部神经-内分泌-免疫网络发挥治疗作用。对温肾健脾法治疗后IBS-D大鼠结肠黏膜、回盲部标本应用免疫组化、westen-blot法观察CCK、VIP、MOT、SP、MC及Th1/Th2的变化，以期深化对IBS-D发病机制的认识，阐明中医药防治IBS-D的作用靶点和疗效机制，为防治IBS-D的研究提供新思路和新方法。

目的：建立IBS-D大鼠模型，分别观察温肾健脾法对IBS-D大鼠MC、T细胞亚群、结肠黏膜、回盲部CCK、MOT、VIP、腰膨大P物质及IBS-D大鼠Th1和Th2细胞因子的影响，从神经、内分泌、免疫网络角度探讨温肾健脾法治疗IBS-D的疗效及作用机制。方法：采用光镜和电镜观察IBS-D大鼠MC；流式细胞术检测T细胞亚群；分别采用Elisa法、免疫组化法及Western-blot法检测IBS-D大鼠CCK、MOT、VIP、P物质及Th1和Th2细胞因子的表达。结果：（1）参照AL-Chaer造模方法为基础，同时予番泻叶灌胃联合夹尾刺激，即采用物理化学刺激共同作用的方法较好的复制了IBS-D大鼠模型。（2）温肾健脾方高、中剂量组及对照组四神丸均能不同程度的减少IBS-D大鼠排便粒数、降低Bristol分级评分、平均稀便级和粪便干湿比重，在一定范围内能降低大鼠内脏高敏感性，且温肾健脾方高、中剂量组在改善大便性状、频率及降低IBS-D大鼠内脏高敏感性方面普遍优于对照组四神丸（P<0.05）。（3）温肾健脾法干预IBS-D大鼠疗效作用的可能机理：①通过降低IBS-D大鼠结肠黏膜及回盲部MC数目及MC平均光密度，抑制MC的表型活化及脱颗粒功能而发挥一定免疫应答作用；②通过提高大鼠血清中CD4+/CD8+比值升高，进而发挥调控T细胞亚群的免疫调节作用。③通过降低IBS-D大鼠结肠黏膜及回盲部释放CCK、MOT的敏感性，从而降低肠道敏感性，减少 CCK、MOT的释放量，以及加快已存在的 CCK、MOT的的降解从而缓解IBS-D的临床症状。④通过降低IBS-D大鼠结肠黏膜及回盲部释放VIP，干扰了胃肠道动力与分泌吸收功能；通过降低SP抑制小肠和结肠粘膜分泌水和电解质，在一定程度上调节VIP、SP分泌异常或使肠道对VIP、SP的敏感性增强。⑤通过降低IBS-D大鼠降低活化的免疫细胞数目，减少促炎性细胞因子Th1的表达，上调抗炎性细胞因子Th2的表达，增强其抗炎活性，从而调控Th1/Th2起到抗炎和调节免疫的作用。结论：温肾健脾方能较好地治疗IBS-D大鼠，其可能机制是通过调控神经-内分泌-免疫网络，具体表现为调节免疫、胃肠道激素、神经内分泌及肠道低度炎症四个方面，从而达到治疗IBS-D的作用。