1,25(OH)2D3协同糖皮质激素对葡萄膜炎自身反应性T细胞免疫调节作用及机制研究

Uveitis is a group of common ocular inflammatory disease involving uvea tract, retina, retinal blood vessels, discus opticus and vitreous, which often leads to severe impairment of visual function owing to its refractory. Autoreactive T cells including helper T cell type 1(Th1) and helper T cell type 17(Th17) initiate the uveitogenic immune response as well as following inflammation. Glucocorticoid is the choice drug for uveitis treatment. Vitamin D is a steroid derivant and plays a crucial role in calcium-phosphorus homeostasis. More recent researches have displayed that active vitamin D may modulate immune cell function through interacted with its receptor existing in diverse immune cells. The latest studies show that serum 1,25-dihydroxyvitamin D3 level reduced in active uveitis patients,which suggests 1,25-dihydroxyvitamin D3 may involve in the pathogenesis of uveitis. Thus,this project planned to investigate the immunomodulation function of 1,25-dihydroxyvitamin D3 to uveito-autoreactive T cells in experimental autoimmune uveitis. ①To analyse the effect of 1,25-dihydroxyvitamin D3 on proliferation,differentiation and secretion function of autoreactive T cells in vitro. ② To investigate the synergistic effect of 1,25-dihydroxyvitamin D3 combined with glucocorticoid on Th1,Th9,Th17 cells in vitro individually. ③To explore the preventive and therapeutic effects of 1,25-dihydroxyvitamin D3 on uveitis in vivo. ④To investigate the effect of 1,25-dihydroxyvitamin D3 combine glucocorticoid on uveitis therapy. This study will provide new views on uveitis pathogenesis. A low side effects prevention program would be established based on this study. The new therapeutic regimen would be of great benefit to improving the quality of life of uveitis patients.

葡萄膜炎是一大类常见、难治性、致盲性眼病，Th1及Th17细胞介导的自身免疫反应在其发病过程中发挥主导作用，糖皮质激素是其首选治疗药物。活性维生素D具有免疫调节功能，葡萄膜炎患者血清中1,25(OH)2D3的水平显著降低。本项目以葡萄膜炎动物模型EAU小鼠作为研究主体，以1,25(OH)2D3作为研究对象，以葡萄膜炎自身反应性T细胞作为研究靶点：①体外实验探讨1,25(OH)2D3对自身反应性T细胞增殖、分化、分泌功能的影响；②体外实验探讨1,25(OH)2D3和糖皮质激素对Th1、Th9、Th17细胞的协同调节作用；③体内实验探讨1,25(OH)2D3对葡萄膜炎的预防和治疗作用及机制研究；④体内实验探讨1,25(OH)2D3协同糖皮质激素对葡萄膜炎的治疗作用。本项目为葡萄膜炎发病机制研究补充新理论，为制定低副作用的防治方案提供理论依据，对提高葡萄膜炎患者的生存质量具有极其重要意义。

葡萄膜炎是指虹膜、睫状体、脉络膜的炎症，几乎累及眼内所有组织；由于种类繁多、病因复杂且好发于青壮年，致盲率高、社会危害性大。近年研究证实，Th1、Th17细胞介导的自身免疫反应在葡萄膜炎发病机制中发挥主导作用。目前在国内临床上，多数类型葡萄膜炎患者都依赖糖皮质激素等免疫抑制剂的中长程治疗。糖皮质激素具有显著的治疗效果，但是长期大量使用激素，会诱发或加重高血压、糖尿病、消化道溃疡、骨质疏松、感染、精神病发作等诸多不良反应。. 维生素D的活性代谢产物1,25(OH)2D3，除了调节体内钙、磷代谢外，还在多种自身免疫病中发挥免疫调节作用。前期研究发现，活动期葡萄膜炎患者血清中维生素D水平显著降低，那么，1,25(OH)2D3在葡萄膜炎发生、发展过程中是否具有免疫调节功能呢？因此，本项目以自身免疫性葡萄膜炎动物模型实验性自身免疫性葡萄膜炎EAU小鼠作为研究主体，首先证明1,25(OH)2D3在葡萄膜炎发生、发展过程中的正性调节作用；然后通过体内、体外实验探讨1,25(OH)2D3对葡萄膜炎自身反应性T细胞的作用机制；最后证明1,25(OH)2D3协同糖皮质激素对葡萄膜炎具有治疗作用。. 我们的研究发现，在诱导EAU模型的同时给予1,25(OH)2D3口服，明显减轻B10RⅢ小鼠葡萄膜炎的严重程度；与未用药组相比，葡萄膜炎抗原IRBP161-180特异性Th1、Th17细胞的数量和功能降低。提示活性维生素D可以改善葡萄膜炎症状，但是不足以阻止其发病。分离EAU小鼠脾脏淋巴细胞进行MTT、FCM、RT-PCR、ELISA试验，发现1,25(OH)2D3可以抑制IRBP161-180特异性T淋巴细胞的增殖功能，抑制Th1、Th17细胞的分泌功能。与地塞米松相比，1,25(OH)2D3对葡萄膜炎自身反应性T细胞的抑制作用较弱，但是可以协同地塞米松发挥免疫抑制效应。. 我们的结果初步证明，1,25(OH)2D3在自身免疫性葡萄膜炎发病机制中具有一定的正向免疫调节作用，它可以协同糖皮质激素治疗葡萄膜炎。维生素D是人体必需的营养素，容易被患者接受和长期服用。联合其治疗葡萄膜炎，有望能减少糖皮质激素的用量，减轻免疫抑制剂的毒副作用，减小患者的经济压力，提高葡萄膜炎患者的生存质量。