gamma/delta T 细胞的免疫调节对自身免疫性葡萄膜炎的影响

gamma/delta T细胞具有连接天然免疫和获得性免疫的过渡性反应的功能。研究认为：gamma/delta T细胞具有免疫调节的能力。本研究将体外分离99%纯gamma/deltaT细胞，体外观察其对致葡萄膜炎反应性T细胞的免疫调节作用，观察反应性T细胞致病能力的变化，探讨这种调节作用的机理；通过gamma/delta基因敲除小鼠tEAU发病情况的特点，不同时期体内补充gamma/deltaT细胞后发病情况的变化，研究gamma/deltaT细胞对tEAU发病的调节情况；由于人类葡萄膜炎具有反复发作的特点，我们观察葡萄膜炎发病早期、发病高峰期、恢复期体内IL-17mRNA的表达量，gamma/deltaT细胞比例的变化。阐明gamma/deltatT细胞的免疫调节作用，以及对葡萄膜炎发生、发展的影响，探讨能否通过将致病性天然免疫细胞转化为调节性免疫细胞，为葡萄膜炎的治疗探索新的途径。

本研究根据课题设计计划，进行了体外细胞实验、自身免疫性动物模型体内实验，以及葡萄膜炎患者相关研究，探讨了gamma/delta T 细胞的免疫调节对自身免疫性葡萄膜炎的影响。体外细胞实验，首先进行了IL-2、IL-23对IRBP特异性T细胞向Th1、Th17、gamma/delta T分化的诱导及致病性研究，发现IL-23可以促进抗原特异性T细胞向Th17细胞分化，其中Th17细胞又以gamma/delta T细胞为主，Th17细胞的致病性明显高于Th1细胞；其次，由IRBP免疫的B6小鼠，采用免疫磁珠可以分离获得99%高纯度的gamma/deltaT和alpha/betaT细胞，通过ELISA及transwell方法，发现高纯化的gamma/deltaT或alpha/betaT在加入IRBP1-20和APCs后，仅产生少量的IL-17，而混合的gamma/deltaT和alpha/betaT则能产生大量的IL-17，gamma/deltaT细胞和alpha/betaT细胞间有效的相互作用需要细胞间相互接触。体内动物实验：过继转移纯的gamma/deltaT细胞给gamma/delta基因敲除小鼠，可以恢复小鼠产生IRBP特异性细胞的能力，并且增强诱导疾病的能力；利用小鼠EAU动物模型，我们观察了不同于gamma/deltaT的另外一种天然免疫细胞-自然杀伤T细胞的免疫调节作用；通过CBA、ELISA、Realtime PCR检测EAU小鼠血清、白细胞以及房水中炎性因子的动态变化，阐明了各个因子在EAU不同时期的表达特点和可能的作用机制。临床观察：通过RT-PCR, CBA方法检测前、后葡萄膜炎和陈旧性葡萄膜炎病人白细胞和血清中炎性因子的水平，发现急性前、后葡萄膜炎的发病期IL-17A表达升高；对比观察了葡萄膜炎患者血清、玻璃体中IL-17等炎性因子的水平，发现炎性因子在两者中表达并不完全同步，说明炎症过程中，全身和局部组织在发病中发挥着不同作用；我们对比观察了葡萄膜炎患者后极部黄斑区OCT表现及B6小鼠tEAU病理特点，发现tEAU小鼠能够模拟人葡萄膜炎病理特征，解释人葡萄膜炎黄斑区OCT图像形成机理。该研究按照标书计划，全面评价了gamma/delta T 细胞的免疫调节作用，探讨了此类细胞对自身免疫性葡萄膜炎发病机制的影响，达到了预期研究目标。