Anti-LPS IgY哺乳动物肠道吸收及机制的研究

严重烧创伤及肝硬化等常诱发肠道细菌内毒素移位入血，导致全身损害甚至死亡。我们前期实验研究提示anti-LPS IgY可以在体外及肠道内有效中和细菌内毒素，减轻内毒素损害。但其能否通过肠道吸收入血并有效中和循环中的内毒素，减轻内毒素的全身损害是限制口服anti-LPS IgY防治内毒素损害的关键因素，对此目前尚无确切结论，其在哺乳动物肠道可能的吸收机制更不清楚。本课题拟以小鼠为模型，采用动物活体成像、蛋白质纯化、分子生物学、质谱分析等技术手段明确anti-LPS IgY 哺乳动物肠道吸收情况；采用蛋白质与细胞相互作用、Tag-lite技术及免疫组织化学技术，poll-down技术等初步探寻ant-lps IgY通过哺乳动物肠道吸收的可能机制及存在的转运载体系统和关键分子。该研究将会明确上述科学问题，为内毒素损害防治提供新思路与途径，也为大分子蛋白质哺乳动物肠道吸收相关研究提供参考。

本项目制备分离纯化了FITC标记的anti-lps IgY，并通过灌胃小鼠的动物实验证明了给小鼠灌胃anti-lps IgY后，可以在体内检测IgY的荧光在肝脏、肺脏、脾脏等脏器的分布和血液抗LPS的抗体效价改变，且可以从小鼠血液内捕捉到到吸收入血的完整anti-lps IgY分子（灌胃后，小鼠血液中可检测到显著升高的结合LPS的抗体活性；血液样品进行SDS-PAGE，显示灌胃IgY的小鼠体内采集的血液中含有与纯化anti-lps IgY分子量相当的条带分布（约180Kd）；在WB中，观察到该条带可以被羊抗鸡二抗显色（说明该条带可能为来源于鸡的蛋白）；在SDS-PAGE和WB实验中，均已正常小鼠为阴性对照，腹腔注射anti-lps IgY小鼠为阳性对照；继续进行目标蛋白的高效液相质谱分析，证实在灌胃anti-lps IgY小鼠血液中存在完整的anti-lps IgY分子，且分子量为186484.9Da，与纯化的anti-LPS IgY和腹腔注射anti-lps IgY小鼠血液中分离的目标蛋白分子量相同，且蛋白丰度很高）；在肠道免疫荧光及免疫组织化学实验中证明灌胃IgY后在肠粘膜组织内存在IgY的结合，但仍未寻找出具体结合的细胞及其受（载）体，需要进一步的研究。目前该研究由于tag-lite实验部分需要花费约15万元的经费，远远超出项目资助金额 ，故暂时未完成该部分的工作。计划采取其他的替代实验方案创造条件继续进行相关研究（替代方案包括小鼠在体肠道灌注实验、小鼠约一个月的长期抗体喂养刺激潜在受体表达上调实验、蛋白质-细胞相互作用实时分析实验定位受体）仍在进行中。暂时无文章正式发表。