断奶仔猪肠道对赖氨酸二肽通透及吸收效应的机制研究

Given a great variety of peptides, and the inadequacy of analytical methodology, studies on peptide nutrition of pigs based on the impact of the molecular weight of peptide and focused on functions of peptides, such as soybean peptides and wheat peptides et al, which makes it difficult to assign which kind of peptide that plays the main role while analysing the research results. Meanwhile, because of the interference of diet peptide, though synthetic peptide is applied, it is hard to determine whether this kind of peptide played its proper role in pigs. Therefore, based on the natural characteristic of zein, a deficiency of lysine, lysine requirement of weaned piglets in NRC (2012), synthetic lysine peptide as raw materials, the protein is confected into semi-purified diets, with our application of stomach fistula infusing technique, cell culture technique, Ussing Chamber technique, intestinal perfusion nodules technique, and using the expression of peptide transporters, and intestinal epithelial lysine bipeptide permeability as indexes, and this study is，lysine dipeptide as breakthrough point,to investigate effects of lysine bipeptide on intestinal tract of pigs and its mechanism, which will provide a significant and novel reference for the development and utilization of peptide nutrition.

鉴于肽的种类繁多，且分析方法学上的不足，导致目前针对猪肽营养的研究多以肽分子量的大小为依据，以混合肽，如大豆肽和小麦肽等的方式进行，这样就造成了在对研究结果进行分析时，很难确定到底是那一类肽在起主要作用；同时，即使是使用人工合成的肽类，但由于日粮本身肽含量的干扰，也很难确定这一类肽对猪生长所起到的应有效果。为此，本申请以赖氨酸二肽为突破点，利用玉米醇溶蛋白天然缺乏赖氨酸的特性，将其配制成半纯合日粮，以美国NRC(2012)断奶仔猪赖氨酸需要量为基础，人工合成的赖氨酸二肽产品为原料，通过胃瘘管灌注技术、肠系膜血管插管技术、尤氏（Ussing chamber）灌流技术、肠道结节灌流技术以及细胞培养分析技术，以肽转运载体表达量、赖氨酸二肽肠道通透率及吸收率等的变化为考察指标，探讨断奶仔猪肠道对赖氨酸二肽通透及吸收效应，以期为肽营养学的研究提供新的参考依据。

生产实践发现，按理想氨基酸模式配制的纯合日粮或氨基酸平衡的低蛋白饲粮时，仔猪并不能达到日粮补充优质蛋白质时所产生的最佳生产性能，这也反映出仔猪对饲料中各种氨基酸的利用程度并不完全取决于日粮氨基酸组成种类数量和比例，也就是说，蛋白质的利用并不完全决定于氨基酸组成，其在消化道的降解产物有一部分将是小肽，并以完整形式被吸收进入循环系统而被组织利用，有益于仔猪健康。.本项目以赖氨酸二肽为研究对象，先后开展了赖氨酸二肽的合成，赖氨酸二肽对肠细胞IPEC-J2 氨基酸含量变化及 mTOR信号的影响，以及不同剂量赖氨酸二肽对哺乳仔猪生理效应机制研究。研究结果表明，赖氨酸二肽具有提高哺乳仔猪增重的趋势，且不影响其内脏器官指数；赖氨酸二肽具有升高回肠绒毛高度的趋势，对仔猪结肠微生物alpha多样性的影响差异不显著，但在科水平上，1%赖氨酸二肽显著降低了拟杆菌科（Bacteroidales）的水平；赖氨酸二肽（5%）使哺乳仔猪血清碱性磷酸酶活性显著升高，降低了血清高密度脂蛋白和总胆固醇含量，对血清矿物质(钙、磷、镁、铁)含量无影响；赖氨酸二肽对细胞活性没有损害作用，可显著缓解赖氨酸缺乏对细胞周期的影响，同时也减少了p53、apaf-1和bax的蛋白表达量，显著升高了二肽吸收相关基因（pept1）的蛋白表达量，可显著升高细胞内赖氨酸含量。本项目通过揭示仔猪肠道对赖氨酸二肽通透及吸收的效应机制，为肽营养学的研究提供新的参考依据。