mRNA差别显示法分离电针有效与无效鼠相关基因

提取电针有效鼠和无效鼠中脑导水管周围灰质RNA为模板进行DDRT-PCR，用银染方法显示差异条带，回收差异条带并进行二次PCR获得19条差异条带，其中9条来自电针有效鼠，10条来自电针无效鼠。将其中18条差异条带分别克隆至PCR21TA载体，转染DH5α细胞，提取重组质粒。用EcoRI酶切鉴定插入片段为正确的克隆，并用Northern点杂交方法从18个克隆中筛选出3个阳性克隆分别是H1、H4和L3。将这3个片段进行测序分析发现H1为177bp、H4为225bp、L3为336bp。用BLAST方式与基因序列数据库进行同源比较，发现与现有基因无明显同源性，均为新的基因，已登录在Genbank，登录号分别是AF141361（H1）、AF141360（H4）、AF141362、（L3）。