牛磺酸对大鼠酒精性肝病防治作用的分子机制研究

酒精性肝病（ALD）是目前人类肝脏损伤的重要原因之一。牛磺酸主要由肝脏合成，对肝脏有保护作用。项目组前期研究证明：牛磺酸可显著降低ALD大鼠血液转氨酶、总脂、胆固醇水平，抑制脂质过氧化损伤，降低炎症相关因子及肝纤维化指标水平，抑制肝脏组织脂肪变性和炎症反应程度，表明牛磺酸对酒精性肝病具有明显的防治作用，但作用机制尚不清楚。本项目拟通过动物实验结合肝细胞体外培养实验，建立酒精性肝病模型，应用实时荧光定量RT-PCR等技术检测牛磺酸对ALD大鼠乙醇代谢相关酶活性及其基因表达水平的影响；测定肝脏脂肪代谢相关酶及其调控因子基因/蛋白表达的变化；测定脂联素及其受体表达、AMPK信号通路下游蛋白磷酸化及表达情况；检测内毒素及其受体、细胞因子基因及蛋白的表达变化；检测肝细胞凋亡情况及凋亡通路的改变，从分子水平揭示牛磺酸防治ALD的作用机制，为ALD的防治提供理论依据。

肝脏是酒精代谢的主要器官，大量饮酒会造成严重的肝脏损伤，导致酒精性肝病（ALD），严重危害人类健康。牛磺酸具有广泛的生物学作用，主要在肝脏合成，对多种原因造成的肝脏损伤具有保护作用。本项目开展牛磺酸对大鼠ALD预防和治疗作用及其机理的研究，旨在为有效的预防ALD的发生、发展，并为ALD的治疗提供有价值的理论依据。. 通过给雄性Wistar大鼠灌胃白酒和吡唑的混合液，饲喂高脂饲料的方法制备ALD动物模型，在造模的同时及造模后在饮水中添加不同浓度牛磺酸进行预防和治疗。预防试验进行12周；治疗试验分别进行4周和8周。试验结束后，杀鼠取血及肝脏，检测大鼠血清、肝脏中脂肪代谢及抗氧化相关生理生化指标，制作大鼠肝脏石蜡切片，H.E染色分析病理变化，TUNEL法检测肝细胞凋亡率，同时提取大鼠肝脏总RNA及总蛋白，采用RT-PCR及Western-blot法检测肝脏脂肪代谢相关酶及转录调控因子基因及蛋白表达，肝脏LPS-KC信号传导通路中相关因子、凋亡相关调控因子的基因表达水平。通过体外构建乙醇损伤肝细胞模型，检测牛磺酸对乙醇诱导的肝细胞损伤的保护作用。. 结果表明：（1）牛磺酸可增加肝脏中乙醇脱氢酶（ADH）、乙醛脱氢酶（ALDH）的活性，加速乙醇在肝脏中的代谢，减轻乙醇及其代谢产物造成的肝损伤；（2）牛磺酸能减轻乙醇引起的肝脏脂质过氧化损伤，清除氧自由基，保护细胞膜免受自由基的攻击，进而保护肝细胞；（3）牛磺酸能通过调控肝脏脂肪代谢相关酶及其转录调控因子的基因、蛋白表达，进而调节肝脏脂肪代谢，减轻乙醇引起的肝脏脂肪代谢紊乱，抑制脂肪酸、胆固醇的合成、促进其分解，减少肝脏脂肪沉积；（4）牛磺酸可降低血浆内毒素含量，减少内毒素对肝脏的损伤；同时，牛磺酸可通过下调 ALD大鼠肝脏LBP、CD14、TLR4、NF-κB和TNF－α基因的表达水平，抑制LPS-KC信号传导系统的开启和传递，减少细胞因子的释放，减轻其对肝脏的损伤；（5）牛磺酸可通过抑制细胞色素C氧化酶及NADH脱氢酶活性，减轻乙醇导致的线粒体氧化损伤，减少Bax的表达，抑制内源性凋亡途径；同时，牛磺酸可下调ALD大鼠肝脏Fas, FasL的表达，抑制外源性凋亡途径，从两方面抑制乙醇导致的肝细胞异常凋亡；（6）牛磺酸可以增加体外培养的肝细胞活性，抑制乙醇导致的细胞损伤。