樟帮特色鳖血柴胡炮制机制及品质研究

According to the feature of Zhang band, Buplurum will be processed by turtle blood. For the processing purpose of "Strengthening the effecct of purging liver heat and stop malaria", the components in raw and processed Buplurum would be seperated and analyzed. The components which showed different in two samples would be chosen as variable. At the same time, the main pharmacutical effect of Buplurum, such as antipyretic, anti-inflammatory, analgesic, protecting liver and anti infection would be determined. The indexes which showed different in raw and processed Buplurum would be chosen as variable either. The variable of components and phamaceutical indexes would be analyzed to clarify the processing mechanism. Meanwhile, as the specility of turtle blood, the biochemical indexes, the amino acid and mineral elements will be applied to determined the quality of turtle blood from different sources. The influence on main material bases and pharmaceutical effects on turtle blood processed Buplurum would be studied. Different condition of storage would also influence the quality of processed Buplurum, the factors of storage condition would be analyzed too. The reslults would provide a better understanding of processing Buplurum and beneficial to the application of turtle blood processed Buplurum in clinic in the future.

遵循樟帮炮制特色，制备鳖血柴胡炮制品种；根据鳖血柴胡"增强清肝、截虐"的炮制目的，分别进行柴胡炮制前后成分研究，确定成分变量；并针对解热、抗炎、镇痛、护肝和抗感染等主要药效，进行炮制前后药效差异比较，确定药效变量；将成分和药效变量采用主成分分析-人工神经网络等技术，进行谱效关联分析，阐明鳖血柴胡炮制机理。同时，由于鳖血辅料的特殊性，课题进一步针对鳖血的不同来源，进行鳖血品质考察，以生化指标、氨基酸和矿物质等指标作为鳖血质控的参数，考察不同来源鳖血对柴胡主要药效物质和药效指标的影响，同时针对炮制品"新鲜配制"的传统要求，开展不同贮藏期和贮藏条件对鳖血柴胡成分和药效的影响研究，明确鳖血柴胡品质调控的主要因素，从而确保炮制品的质量可控。研究将进一步促进具有区域特色的饮片炮制科学内涵研究，有利于传承和弘扬传统中医药文化，也将为鳖血柴胡的临床应用提供理论科学依据，从而进一步扩大鳖血柴胡品种的临床应用

鳖血柴胡是以新鲜鳖血炮制柴胡的一种传统、特色饮片。鳖血柴胡临床运用经验丰富，对于真脏虚损之邪热疗效显著。鳖血柴胡饮片的现代研究仍为空白，本项目系统对其炮制工艺、化学成分、药理作用等方面进行现代炮制研究。1、在鳖血柴胡饮片炮制工艺研究方面：首次建立了鳖血柴胡炮制工艺，以柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d及醇溶性浸出物含量为综合评价指标，以炮制时间、加鳖血量、炮制温度为考察因素，采用正交设计试验方法优选了鳖血柴胡的最佳炮制工艺，为进一步进行鳖血柴胡饮片的质量研究与炮制机制研究奠定了基础。2、在鳖血柴胡饮片化学成分研究方面：（1）首次建立了鳖血柴胡饮片柴胡皂苷的定量方法，采用HPLC同时测定柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d含量的方法（2）在鳖血柴胡饮片挥发油成分研究方面，采用GC-MS方法建立了鳖血柴胡饮片挥发油成分的定性方法，完成了柴胡生品中114种挥发油成分、鳖血柴胡中105种挥发油成分的定性，其中包括47种共有成分。（3）在鳖血柴胡饮片氨基酸成分研究方面，采用PITC柱前衍生同时测定鳖血柴胡及生品柴胡中17种氨基酸，可用于鳖血柴胡饮片质量评价。3、在鳖血柴胡药理研究方面：（1）建立了大鼠UPLC/Q-TOF-MS血浆代谢指纹谱，考察鳖血柴胡干预干酵母致热大鼠的代谢状态的变化趋势，为鳖血柴胡增效机制提供了评价依据。初步鉴定了包括氨基酸、磷脂、鞘胺醇的12种生物标志物，为鳖血柴胡解热作用的炮制机制提供代谢组学新证据。（2）采用酶标仪法检测大鼠血清中IL-1β、下丘脑中cAMP、脑腹中隔区中AVP含量的定量方法鳖血柴胡高剂量组可显著改善大鼠血清中的IL-1β、下丘脑中的cAMP、脑腹中隔区中的AVP增高水平，鳖血柴胡在解热方面的增效机制与鳖血柴胡高剂量组能够显著改善发热大鼠血清中的IL-1β、下丘脑中的cAMP、脑腹中隔区中的AVP增高水平有关。（3）采用全自动生化仪法检测大鼠血清中AST、ALT、LDH、TBA含量的定量方法，评价了鳖血柴胡高中低剂量组对CCL4致急性肝损伤大鼠的干预作用，并与联苯双酯、生品柴胡进行对比研究，结果表明，鳖血柴胡低剂量组即可显著改善CCL4致急性肝损伤大鼠血清中AST、ALT、LDH、TBA的增高水平，改善效果与阳性药联苯双酯作用相当。综上，项目从基源考究、炮制工艺、化学物质基础、药效基础等方面科学研究，为阐明鳖血柴胡炮制机制奠定基础。