不同环境压力状态下粪肠球菌生物膜基因及分泌蛋白表达差异比较研究

Enterococcus faecalis has been recognized as a main endodontic pathogens of refractory apical periodontitis and post-treatment endodontic disease, its ability to withstand environmental pressure is the key to grow and reproduction in the environment of lack of nutrients, high alkaline and anti-bacterial drug, and then cause chronic infection in the root canal. The aim of this study is to continue to focus on “how Enterococcus faecalis biofilm can survive under extreme pressure environment " the same as youth fund research. We will use suppression subtractive hybridization and molecular biology techniques to compare differences in gene expression of Enterococcus faecalis biofilm in the state of different environmental pressures. Through our study, we would like to find closely related genes of Enterococcus faecalis biofilm resistance to environmental pressures, and then elaborated from gene level to identify the mechanism of Enterococcus faecalis biofilm resistance to extreme environmental pressure, to provide experimental evidence for mechanisms of Root canal reinfection and drug intervention.

粪肠球菌是迁延不愈的难治性根尖周炎及根管治疗后疾病的主要病原微生物，具有极强的抵御环境压力能力是其能在营养物质缺乏、高碱性、抗菌药物存在等恶劣环境中继续生长繁殖，引发根管慢性感染的关键。本研究似在青年基金研究基础上，继续围绕“粪肠球菌生物膜如何在极端压力环境下生存”这一科学问题进行后续实验，采用抑制性消减杂交等分子生物学技术，比较粪肠球菌生物膜在不同环境压力状态下的基因表达差异，通过研究找出某些与粪肠球菌生物膜抵抗环境压力密切相关的基因，在青年基金从生物膜组成、结构、代谢产物方面研究的基础上，进而从基因水平系统阐述其抵抗极端环境压力的机制，为研究粪肠球菌生物膜在根管再感染中的作用机制及药物干预提供实验依据。

在课题组成员通力合作下，该项目按照研究计划顺利稳步进行，获得主要研究进展如下：.1.在体外成功构建出不同环境压力状态下粪肠球菌生物膜模型.采用粪肠球菌标准菌株ATCC33186，分别摸索高碱、饥饿及次氯酸钠浓度及培养条件，经过反复实验验证，成功在体外构建出高碱性环境状态、饥饿状态及次氯酸钠存在状态下的粪肠球菌生物膜模型，结果显示生物膜模型可行，完全可应用于环境压力状态下粪肠球菌生物膜的各项研究，为顺利进行后续实验构建了平台。 .2. 完成不同环境压力状态下粪肠球菌生物膜基因表达差异研究.应用抑制性消减杂交技术，对比粪肠球菌生物膜在不同压力状态下生物膜基因表达谱差异，寻找与粪肠球菌抵抗不同环境压力密切相关的基因。.3．基本完成差异基因生物信息学分析及验证.1）. 对差异基因进行斑点杂交验证：经过点膜、探针标记及纯化、预杂交和杂交以及洗膜等步骤，对差异基因进行斑点杂交验证。.2）．测序分析这些差异片断，BLAST比对获得这些片段的基因信息，进而推断其功能。.4.发表论文及会议交流.目前已接收SCI收录论文1篇，已投出SCI收录论文1篇，拟参加2015年国际会议一次，会议摘要已接收。拟参加2015年全国牙体牙髓病学会议两人次。.5.研究生培养：.培养在读博士研究生1名，拟于2016年5月答辩。