热应激条件下肉仔鸡及其体外培养细胞HSP90表达对糖皮质激素受体核转位的作用机制研究

热应激条件下分子伴侣HSP90在糖皮质激素受体从细胞胞浆进入胞核的转位过程中的作用机制还未清楚，本项目将通过上调和下调HSP90的表达来研究其与糖皮质激素受体（GR）核转位的关系。首先研究确定肉仔鸡GR和HSP90表达的敏感部位，并对敏感部位的细胞进行培养，建立体外热应激条件下HSP90上调和下调表达模型，采用Western Blot和免疫共沉淀法分析检测热应激前后细胞胞浆、胞核中总HSP90和GR蛋白、结合形态HSP90和GR蛋白的含量，以此阐明胞浆中游离或结合的HSP90和GR转运到胞核的变化规律，在此基础上进一步以肉仔鸡为对象建立热应激条件下HSP90上调和下调表达的活体动物模型，研究HSP90表达对活体细胞中GR核转位及组织细胞损伤状态的影响，并与体外试验结果进行比较分析，深入探讨热应激条件下HSP90不同表达水平对细胞GR核转位的作用机理，为家禽的热应激调控提供理论基础。

本项目紧密围绕拟定的预期目标开展研究工作，课题组成员密切合作，通过上调和下调HSP90的表达，深入研究了HSP90与糖皮质激素受体（GR）核转位的关系。首先研究确定了肉仔鸡GR和HSP90表达的敏感部位为外周血和胸肌，并通过分离培养外周血淋巴细胞，建立了体外热应激条件下的HSP90 上调和下调表达模型，采用Western Blot方法检测了热应激前后细胞胞浆、胞核中总HSP90 和GR蛋白的含量，以此阐明胞浆中游离或结合的HSP90和GR转运到胞核的变化规律。在此基础上，进一步以肉仔鸡为对象，通过热应激前注射HSP90的抑制剂建立了热应激条件下HSP90下调表达的活体动物模型，研究了HSP90表达对活体细胞中GR核转位及组织细胞损伤状态的影响。并与体外试验结果进行比较分析，深入探讨热应激条件下HSP90不同表达水平对细胞GR 核转位的作用机理，为家禽的热应激调控提供理论基础。此外，本项目还利用原核表达技术，克隆并表达肉鸡GR的部分基因序列，并以纯化的蛋白制备多克隆抗体，免疫印迹分析表明该抗体具有很好的特异性。高特异性的肉鸡GR抗体可为GR在肉鸡组织或细胞中的定量分析及其相关研究提供重要工具。. 本课题组基本完成了预定的研究目标，在SCI收录期刊Poultry Science上投稿研究性论文1篇，目前处于二审中，在中文核心期刊上发表文章1篇，在会议论文集上发表文章1篇。本课题组培养了1名博士后，已经顺利出站（出站报告封面见附件），此外有1名博士和1名硕士正在进行相关工作研究。