针刺促脑缺血后血管新生的microRNAs调控机制研究

脑血管新生是脑缺血后改善局部血液供应，减轻脑损伤的重要途径。新近研究表明，特定microRNAs在机体血管新生中具有重要的调控作用。基于这一新的科学发现，以及课题组前期有关针刺治疗脑缺血的临床与实验室研究证据，本项目拟采用大脑中动脉栓塞大鼠模型，运用实时荧光定量PCR、western blot、microRNA外源性抑制和过表达等技术，通过动态观察针刺水沟穴对脑缺血后脑组织促血管新生microRNAs、抗血管新生microRNAs及其靶基因生物调控网络的影响，以期从血管新生相关microRNAs及其对靶基因转录后调节的分子机制深入阐释针刺促进脑血管新生，减轻脑缺血损伤的可能物质基础与有效作用靶点。本研究将有助于进一步揭示脑缺血的病理机制与防治规律，为针刺治疗脑缺血提供客观的实验与理论依据。

背景：脑血管新生是脑缺血后改善局部血液供应，减轻脑损伤的重要途径。新近研究表明，特定microRNAs在机体血管新生中具有重要的调控作用。基于这一新的科学发现，以及课题组前期有关针刺治疗脑缺血促进血管新生的临床与实验室研究证据，本项目从针刺对血管新生相关5个microRNAs着手，揭示针刺治疗脑缺血的可能机制。方法：实验大鼠分正常组、假手术组、模型组和治疗组4组各4个时相，采用大脑中动脉栓塞大鼠模型，运用Longa神经功能缺损评分、TTC染色法、光镜、电镜等技术评估针刺对MCAO大鼠的治疗作用，运用免疫组化技术研究针刺对大鼠缺血半暗带周围脑微血管新生和VEGF的影响，采用实时荧光定量PCR、western blot、microRNA 外源性抑制等技术，动态观察针刺水沟穴对脑缺血后脑组织促血管新生microRNAs、抗血管新生microRNAs 及其靶基因生物调控网络的影响。结果：针刺可以改善MCAO大鼠神经功能缺损评分（P＜0.05），减少脑梗死体积 (P＜0.05)，改善光镜下病理结构和电镜下超微结构。针刺可上调MCAO大鼠缺血半暗带周围CD34的表达(P＜0.01)，提示促进了脑微血管新生。针刺组VEGF表达增多 (P＜0.01)。针刺上调了MCAO大鼠脑组织中促血管新生miR-210、miR-126、miR-27b的表达(P＜0.05，P＜0.01）。下调了抑血管新生的miR-328、miR-221的表达（P＜0.05，P＜0.01）。外源性抑制miR-210后，针刺对脑微血管新生标记物CD34表达的影响减弱(P<0.01)。针刺可不同程度地调节microRNAs靶基因：ephrinA3、SPRED1、PIK3R2、TSP-1、CD44、eNOSmRNA和蛋白（P＜0.05，P＜0.01），除CD44外均呈现负调控机制。结论：针刺对脑缺血有良好的治疗作用，可以促进血管新生，其作用机制可能与调节促血管新生microRNAs（miR-210、miR-126、miR-27b）和抗血管新生microRNAs（miR-328、miR-221） 及其靶基因生物调控网络的有关。研究结果揭示了针刺治疗脑缺血可能的物质基础与有效作用靶点，有助于进一步揭示脑缺血的病理机制与防治规律。