火鸡疱疹病毒基因组非必需片段的筛选

通过建立火鸡疱疹病毒（HVT）DNA提取的新方法，获得了HVT纯DNA，以此构建了HVTDNA文库。以核酸探针和随机筛选的方法在HVT文库中挑选出相应的DNA片段，进行了酶切分析和亚克隆，并将LacZ报告基因插入其中构建了6个转移载体质粒。将这些重组质粒分别与感染性HVT共转染鸡胚成纤维细胞（CEF），其中含有HVTgA基因的转移载体质粒共转染后，初代CEF中观察到了兰色的病毒蚀斑，初步证明HVT的gA基因为该病毒的非必需基因。另一个以来自HVTDNABamHl8.0kb的BamHl和HindⅢ亚克隆片段（约2.0kb）构建的转移载体共转染后出现了兰色病毒蚀斑，经三代蚀斑克隆纯化后，Lac2基因表达和定，证明该DNA片段为HVT的非必需DNA区，可以在该区内插入外源目的基因，构建以HVT为载体的基因工程疫苗。