宫宁颗粒有效组分通过Rho／Rock信号通路转化IUD出血副反应子宫内膜VSMC表型机制的研究

Intrauterine device (IUD) is the international commonly used female contraceptive methods, the use of the IUD most countries, but the side effects are bleeding IUD birth control research in the field difficult. Our previous confirmed IUD contraceptive endometrial vascular smooth muscle (VSMC) presence of phenotypic abnormalities, endometrial Gongning particles can be converted to synthetic VSMC contractile phenotype; now recognized as Rho / ROCK pathway is an important part of the regulation of VSMC phenotype. Based on this, we put forward topics: Endometrial VSMC phenotypic abnormalities incidence is key, Gongning particles (Sanqi Qiancao) effective component, possibly through Rho / ROCK pathway reversed Vascular remodeling rational play hemostasis. This study will establish a noninvasive IUD rats and in vitro human endometrial contraception VSMC model, using transmission electron microscopy, Western Blot, qPCR and Rho / ROCK blocking agents observed Sanqi Qiancao component intervention Rho / ROCK pathway of inflammatory cytokines, table type conversion metrics (a-sMA, sM22a, G-actin), MLCP RhoA / ROCK I MBSThr-697 phosphorylation and expression of apoptosis and proliferation substrate, and thus clear the mechanism and treatment of traditional Chinese medicine theory connotation of wealth planning field.

放置宫内节育器(IUD)是国际普遍使用女性避孕法，我国是IUD使用最多国家，但IUD出血副反应是计生领域研究难点。课题组前期证实IUD避孕大鼠子宫内膜血管平滑肌(VSMC)存在表型异常，宫宁颗粒可使内膜VSMC合成型转化为收缩型；目前公认Rho/ROCK通路是VSMC表型调控重要环节。基于此，课题提出：子宫内膜VSMC表型异常是发病关键环节，宫宁颗粒(三七茜草)有效组分可能通过Rho/ROCK通路逆转血管病理性重塑而发挥止血。本研究将建立无创IUD避孕大鼠和体外人子宫内膜VSMC模型，采用透视电镜、Western Blot、qPCR和Rho/ROCK阻断剂等，观察三七茜草组分干预Rho/ROCK通路炎症因子、表型转化指标(a-sMA、sM22a、G-actin)、MLCP、RhoA/ROCK I及底物MBSThr-697磷酸化和增殖凋亡表达，从而明确治疗机理和丰富计生领域的中医药理论内涵。

研究背景：放置宫内节育器（intrauterine device，IUD）是国际普遍使用的女性避孕方法之一。但其常伴随的异常子宫出血、感染、腰腹痛等副反应显著影响其接受性和续用率。探索 IUD 出血副反应的发病机制，进一步明确其治疗关键干预环节，是计划生育领域的重要研究内容。研究内容：依靠课题组前期建立的符合临床 IUD 放置特征的无创法大鼠 IUD 诱发的出血副反应模型，提取课题组首创的专门防治 IUD 出血副反应的中成药宫宁颗粒中的代表药物——三七、茜草。根据中药有效组分理论，提取三七总皂甙、茜草总醌，制成中药宫内缓释系统，并通过实验证实其基本治疗效果及潜在作用机制。 重要结果、关键数据及其科学意义：三七茜草有效组分宫内缓释系统可降低 IUD 出血副反应大鼠上皮细胞脱落、腺体扩张、间质水肿、炎性细胞浸润的程度，可升高宫腔冲洗液中PAI-1 的含量， 降低 t-PA 的含量，升TXA2、PGI2 含量，降低 TXA2/PGI2 的比值比，通过调节 t-PA、PAI-1 和 TXA2、PGI2 平衡以防治 IUD 出血不良反应。此外，经三七、茜草有效组分宫腔给药干预后，IUD 出血副反应大鼠子宫组织的PDGF、TGF-β 、ET-1、IL-1、ALP、CA、TIMP-1、RhoA、RhoB、RhoC、Rock1、Rock2 的蛋白及RNA含量均较降低（P<0.05），而α-SMA 与 SM22-α含量升高（P<0.05）。这证实了三七茜草有效组分宫内缓释系统通过抑制Rho/Rock信号通路的激活，干预子宫内膜血管平滑肌细胞（VSMC）的表型转化，从而增加VSMC收缩型的表达，是预防IUD出血副反应的作用机制之一。体外细胞实验显示，在透视电镜下，三七茜草有效组分可促进子宫VSMC自噬小体形成；PI/Annexin-V-FITC 法检测细胞凋亡率升高； Bax、Caspase-3、Caspase-9、Beclinl、 LC3II、Atg5、Atg12 等指标均呈高表达，（P＜0.01）。这证实了三七茜草有效组分促进异常子宫内膜 VSMC凋亡与自噬的作用是其预防IUD出血副反应的另一重要机制。