纤维连接蛋白-整合素α5协同调控介导视网膜新生血管侵袭作用及机制研究

视网膜新生血管（RNV）侵袭、突破视网膜内界膜是其致盲过程中重要病理过程，机制不明。本课题组前期工作中发现纤维连接蛋白（FN）及其在血管内皮细胞表面受体整合素α5共同参与调控视网膜新生血管，特别是内皮细胞迁移，可能介导视网膜新生血管侵袭玻璃体视网膜界面。以此为基础，本课题拟在RNV小鼠模型中明确FN-整合素α5介导RNV侵袭作用；采用特异性线性肽抑制/过表达促进FN-α5结合活化，应用PCR芯片筛选其下游信号通路，探讨其参与RNV发生和侵袭的分子机制；观察正向和负向调控FN-整合素α5结合位点对RNV穿透内界膜进入玻璃体内过程的影响，探索通过特异性干预FN-整合素α5结合位点，抑制新生血管侵袭的可行性和安全性。通过上述研究，将阐明视网膜新生血管侵袭中关键分子及调控机制，为预防RNV导致的严重并发症提供理论和实验依据，为治疗视网膜缺血性病变，挽救患者视功能提供新思路。

课题组前期研究发现Integrinα5β1可能参与了视网膜新生血管的病理过程，是协同调控血管内皮细胞迁移、侵袭的关键分子。以此为基础，本课题将视网膜新生血管中Integrinα5β1调控作用作为研究切入点，首先分别建立了脉络膜及视网膜新生血管的动物模型，然后在两种动物模型中分别验证Integrinα5β1表达水平和新生血管侵袭的相关性；进一步采用特异性抗体阻断技术，在已建立的体外细胞培养中探索调控Integrinα5β1-FN结合位点对脉络膜及视网膜毛细血管内皮细胞迁移、侵袭的影响及安全性，明确其下游信号转导通路，探讨其参与新生血管发生和“侵袭”的分子机制。动物实验结果显示Integrinα5β1抑制剂ATN-161可以显著抑制脉络膜血管新生，体外实验证实ATN-161虽然对脉络膜血管内皮细胞（HCEC）没有毒性作用，但不能抑制VEGF诱导的细胞增殖；进一步细胞实验发现ATN-161通过降低pFAK磷酸化，阻断外向内integrin信号通路，进而抑制VEGF诱导HCEC细胞迁移，提示VEGF可能通过活化Integrinα5β1促进脉络膜血管新生；细胞实验深入研究发现另外一种Integrinα5β1抑制剂Ac-PHSCN-NH2通过相同机制（降低pFAK磷酸化，阻断外向内integrin信号通路）抑制VEGF诱导的视网膜血管内皮细胞迁移。上述研究成果提示Integrinα5β1和FN在病理性脉络膜/视网膜血管新生中起到了关键作用，可能成为今后临床治疗的有效靶点，体内外研究为在视网膜脉络膜血管新生相关疾病中干预Integrinα5β1提供了新思路及实验数据参考。