基于多种动物模型的广谱抗甲型流感病毒小分子抗原肽的筛选

甲型流感病毒较易发生抗原漂移和转变，若现有疫苗对其主动免疫的策略无效，则会导致新流感疫情的大爆发，并出现针对新毒株疫苗的研制严重滞后于爆发流行的被动局面。有鉴于此，本课题拟通过对不同亚型甲型流感病毒的全基因组序列比对，结合蛋白抗原表位的软件预测，筛选出保守的抗原肽段，然后基于已建立季节性流感病毒H1N1、H3N2，高致病性禽流感病毒H5N1，以及2009年新型甲型H1N1病毒的BALB/c小鼠模型、雪貂模型、及恒河猴模型，研究当其分别被各保守抗原肽，联合高效新型佐剂C48/80免疫后的受保护情况，力图发现能同时保护多种动物模型对抗多种常见甲型流感病毒攻击的广谱小分子抗原肽，同时对其所引起机体免疫保护的机理进行研究，分析保护作用主要是源于中和抗体的产生，还是由T淋巴细胞免疫所介导。研究结果为广谱流感疫苗的研发提供理论和实验依据，具有较好的临床应用前景。

高致病性禽流感H5N1病毒较易发生抗原漂移和转变，若现有疫苗对其主动免疫的策略无效，则会导致新流感疫情的大爆发，并出现针对新毒株疫苗的研制严重滞后于爆发流行的被动局面。有鉴于此，本课题通过对多株不同物种来源、不同采集时间及地点的H5N1病毒的HA基因序列进行多重序列比对，找出保守区域并用[G4S]3 linker进行串联后，分别对基因序列及多肽序列进行合成。用该基因联合表达后的蛋白疫苗对小鼠进行免疫后，小鼠可产生针对不同Clade流感病毒的抗血清，其中以Clade 2.3.4效价最高。免疫后小鼠再被致死剂量的H5N1病毒攻击时，12.5%的小鼠可存活并恢复。同时，通过“多肽阵列”筛选技术，发现肽段VTVTHAQDILEKTHN可同时与感染了Clade2.3.4，及Clade2.3.2.1病毒的雪貂抗血清发生明显的Ag-Ab阳性反应，说明该肽段有成为广谱抗H5N1病毒小分子抗原肽的潜质，但还需进一步小鼠实验的验证。另一方面，基于小鼠模型的实验证实，肥大细胞活化剂C48/80作为新型佐剂仅可提高季节性流感H1N1感染后的受保护程度，而无法保护小鼠免受H5N1的感染。由于C48/80激活的是机体的先天免疫系统，推测这种免疫保护的差异性是由于H5N1及季节性流感H1N1所诱导出不同程度的先天免疫反应所导致。研究结果为广谱流感疫苗的研发提供理论和实验依据，具有较好的临床应用前景。