microRNA21通过调节CTGF参与TGF-β1诱导肾间质纤维化的机制及中药扶肾方作用的研究

Renal interstitial fibrosis is a chronic kidney disease progress of various etiological factors to the final common process of ESRD, renal tubular epithelial to mesenchymal transition (EMT) is the key pathogenesis of renal interstitial fibrosis. Current renal tubular EMT regulation mechanism is still not clear. Recently, the micro ribonucleic acid (miRNA) on the role of EMT in much attention at home and abroad. The experiments in the previous experimental basis, with the help of RT-PCR, Westernblot, gene transfection technique, differences of expression in unilateral ureteral obstruction rats kidney tissue lesion side in miRNA-21, CTGF,observe the transdifferentiation of miR-21 effect in the TGF- beta 1 induced NRK-52E cells in vitro, and to investigate the possible mechanism by adjusting the CTGF involved in TGF- beta 1 induced renal tubular epithelial cells in EMT micRNA-21, a possible target to elucidate the miR-21 involved in the regulation of renal tubular EMT and renal side of renal interstitial fibrosis mechanism.

肾间质纤维化是各种不同病因的慢性肾病进展到ESRD的最终共同病变过程，肾小管上皮－间充质转分化（EMT）是肾间质纤维化的关键致病机理。目前肾小管 EMT 的调控机制仍不十分明确。近来微小核糖核酸 (miRNA)在 EMT 中的作用备受国内外关注。本实验在前期实验基础上，借助RT-PCR、westernblot、基因转染等技术，研究单侧输尿管梗阻大鼠病变侧肾脏组织中miRNA-21、CTGF 的差异表达，在体外实验中观察 miR-21 在TGF-β1诱导的 NRK-52E细胞转分化中的作用，探讨micRNA-21通过调节CTGF参与TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT的可能机制，阐明 miR-21 参与调控肾小管EMT 的可能的靶点以及中药扶肾方延缓肾间质纤维化作用机制。

肾间质纤维化（RIF）是多种慢性肾脏疾病发展到终末期肾功能衰竭(ESRD)的共同途径，肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化（EMT）发挥着重要作用。小分子 RNA (miRNA)是新近发现的一类非编码RNA分子，多种 miRNA 参与EMT的发生。既往研究显示扶肾方可延缓肾间质纤维化。本研究采用单侧输尿管结扎大鼠及 TGF-β1 诱导的肾小管上皮细胞转分化模型为研究对象，运用 PCR 技术检测肾组织及细胞 miRNA-21 的表达，研究 miRNA-21 在肾间质纤维化模型中的表达情况。在造模后予扶肾方进行干预后，通过称量大鼠体重、 左肾重，检测血肌酐、尿素氮、尿白蛋白，HE 染色、Masson 染色、电镜观察肾脏病理 形态变化，PCR 检测肾组织 miRNA-21 的表达，Western Blot 检测细胞外基质成分 CTGF、FN 蛋白及肾小管上皮细胞转分化相关蛋白Vimentin、ZO-1 蛋白的表达来探索扶肾方治 疗肾间质纤维化的疗效及可能作用机制。研究发现，miRNA-21 在肾间质纤维化的肾组织内呈高表达；扶肾方可以通过降低肾间质纤维化动物模型的 Scr、BUN、尿白蛋白、miRNA-21、CTGF mRNA、Vimentin 蛋白、CTGF 蛋白、FN 蛋白而治疗肾间质纤维化，其机制可能为抑制上皮细胞转分化及细胞外基质沉积。miRNA-21 在 TGF-β1 诱导肾小管上皮细胞转分化的过程中呈高表达；高表达的 miRNA-21 可以促进 TGF-β1 诱导肾小管上皮细胞转分化的进程；扶肾方可以通过降低 miRNA-21、Vimentin 蛋白、CTGF 蛋白、FN 蛋白而治疗肾间质纤维化，其机制可能为抑制上皮细胞转分化及细胞外基质沉积。