基于SHH-Gli1-FoxM1途径研究肾衰灵方减轻肾间质纤维化的作用机制

Renal interstitial fibrosis (RIF) is the common pathological feature of multiple chronic kidney diseases.It has been recently reported that Sonic Hedgehog (SHH)-Gli1 signaling pathway played a vital role in RIF mediated by activated myofibroblast .Forkhead box M1 (FoxM1) is an important transcription factor of the downstream of the pathway,but its mechanism is still unclear.Previous clinical and animal experients have shown that the experience medicine of national medical master professor Zhengxin-Shenshuailing Formula (SSLF) alleviated renal tubulointerstitial injury via down regulating the expression of SHH and Gli1.Therefore,we make the hypothesis that SSLF could regulate the SHH-Gli1-FoxM1 signaling pathway to improve RIF.This study will use the experimental methods of real-time PCR,Western blot,chromatin immunoprecipitation assay (ChIP) and RNA interference to elucidate that relationships between SHH cascade and renal fibrosis,and evaluate the improving effect of SSLF on RIF in vitro and vivo. Therefore,we will validated the hypothesis that SSLF would improve RIF through inhibiting SHH-Gli1-FoxM1 signaling.The study will further clarify the pathogenesis of RIF and the biological mechanism of SSLF on improvement of RIF.

肾间质纤维化(RIF)是多种慢性肾脏病进展的共同途径和病理基础。肌成纤维细胞活化是RIF发生发展的核心环节，SHH-Gli1信号通路已被证实在肌成纤维细胞活化介导的RIF中发挥关键作用。最新发现的FoxM1作为SHH-Gli1信号通路下游的重要调控蛋白，在RIF中的具体作用机制尚有待阐释。前期临床与基础研究均证实国医大师郑新教授经验方—肾衰灵方疗效确切，改善RIF药效显著，能够下调SHH和Gli1表达水平。基于此发现，我们提出“肾衰灵方通过抑制SHH-Gli1-FoxM1途径介导的RIF治疗慢性肾脏病”的研究假说。本研究拟结合体内、外实验，采取质粒转染、RNA干扰、染色质免疫共沉淀等技术明确SHH-Gli1-FoxM1途径在RIF中的分子机制，揭示肾衰灵方通过抑制该途径改善RIF的作用。本研究将为肾衰灵方治疗RIF提供科学依据，对于探索肾衰灵方的机制研究及其科学内涵具有重要意义。

项目背景：肾间质纤维化(RIF)是多种慢性肾脏病进展的共同途径和病理基础。肌成纤维细胞活化是RIF发生发展的核心环节，SHH-Gli1信号通路已被证实在肌成纤维细胞活化介导的RIF中发挥关键作用。最新发现的FoxM1作为 SHH-Gli1信号通路下游的重要调控蛋白，其在RIF中的具体作用机制尚有待阐释。 前期临床与基础研究均证实国医大师郑新教授经验方—肾衰灵方疗效确切，改善RIF药效显著，能够下调SHH和Gli1表达水平。基于此发现，我们提出 “肾衰灵方抑制SHH-Gli1-FoxM1途径介导的RIF治疗慢性肾脏病”的研究假说。.研究内容：本研究以SHH-Gli1-FoxM1途径为切入点，将体内动物实验和体外细胞实验相结合，观察RIF过程中SHH-Gli1-FoxM1途径和间质纤维化变化，在此基础上利用RNA干扰FoxM1，抑制SHH-Gli-FoxM1途径，揭示该途径介导肌成纤维细胞激活在RIF中的作用。.重要结果：与模型（UUO）组比较，肾衰灵（SSLF）组、环巴胺（CPN）组、肾衰灵+环巴胺（S+C）组血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）水平显著降低。SSLF组和CPN组SCr、BUN较S+C组升高。PAS染色显示，与模型组比较，SSLF组肾小球评分下降10%，CPN组下降12%，S+C组下降26%。Masson染色显示，与模型组比较，SSLF组肾小管间质评分下降9%，S+C组肾小管间质评分下降14%。S+C组肾小球评分下降近21%。WB检测提示，与UUO组比较，SSLF组、CPN组与S+C组RIF标志蛋白和SHH-Gli1-FoxM1途径信号分子蛋白水平明显下降。体外实验中肾衰灵组的Gli1、FoxM1、Snai1的表达均显著低于SHH组。肾衰灵组的Collagen I、α-SMA、PCNA的表达均显著低于SHH组。FoxM1干扰组的α-SMA、Collagen I和PCNA的蛋白水平明显降低，SHH干扰后α-SMA、Collagen I和PCNA的蛋白水平较干扰组显著升高；肾衰灵方能下调SHH干扰组的RIF标志蛋白水平。进一步采用体内外实验揭示大黄单体大黄酸能通过SHH-Gli1信号通路发挥抗肾纤维化作用。.科学意义：本研究将为肾衰灵方治疗RIF提供科学依据，对于探索肾衰灵方的机制研究及其科学内涵具有重要意义。