SDF-1/CXCR4诱导淋巴管内皮祖细胞在肺鳞癌组织中形成新生淋巴管的机制研究

本研究探讨SDF-1/CXCR4轴在诱导淋巴管内皮祖细胞形成新生淋巴管的机制。先通过体外实验观察SDF-1对LPECs趋化迁移作用，再进一步在大鼠皮下注射SDF-1、VEGF-C，观察SDF-1/CXCR和VEGF-C/VEGFR-3对LEPCs的动员作用，最后建立大鼠肺鳞癌模型，构建针对大鼠CXCR4基因的小分子RNA干扰序列，采用阳离子脂质体转染体外培养的LPECs，并注射入大鼠体内，检测肿瘤组织、瘤周组织、正常肺组织淋巴管形成情况、肿瘤生长情况及VEGF-C、基质金属蛋白酶（MMP）-9的表达情况，研究VEGF-C、MMP-9在SDF-1诱导淋巴管形成中的作用，阐述其诱导淋巴管形成的机制，并观察针对SDF-1/CXCR4的RNA干扰治疗抗淋巴管治疗的效果，为肺癌的抗淋巴管转移提供可能的基因治疗方法。

目的.肺癌的发病率和死亡率在所有恶性肿瘤中居首位，而经淋巴道转移是肺癌进展的重要标志，也是制定治疗方案、判断预后的重要因素。本研究旨在探讨趋化因子及其受体SDF-1/CXCR4轴在肺癌淋巴管新生中的作用及可能的机制。..研究方法.研究包括三个方面：第一部分，选取2010年1月-2012年12月间在本院行肺癌根治术、术后病理为肺腺癌(I-IIIA)的165例患者，查询患者临床信息，制作肿瘤组织石蜡切片并使用免疫组织化学的方法对CXCR4与Notch1进行染色，分析CXCR4与Notch1的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结是否转移、术后总体生存率、以及肿瘤组织内血管密度和淋巴管密度的关系；第二部分，构建shRNA慢病毒质粒，体外抑制淋巴管内皮细胞(LEC)中CXCR4和Notch1的表达，qPCR分析其对相关基因mRNA水平的影响，以及对LEC在Fibrin凝胶体外模型中形成新生淋巴管的影响；第三部分为体内实验，使用了稳定抑制CXCR4或Notch1的Lewis 肺癌(LLC)细胞建立小鼠Lewis肺癌模型，以研究阻断CXCR4或Notch1对小鼠Lewis肺癌肿瘤生长和肿瘤淋巴管密度的影响。..结果.人肺腺癌组织共表达CXCR4/Notch1与肺癌淋巴结转移及术后较差的预后相关，且这种相关性可能与其促进血管、淋巴管新生有关;.LEC细胞中阻断CXCR4可下调Notch1及其下游基因的表达，进而影响淋巴管生成。虽然阻断CXCR4或Notch1对VEGFR3无直接影响，却能上调sVEGFR3的表达，竞争性抑制VEGFR3的活性，间接影响淋巴管生成。而同时阻断CXCR4和Notch1对Notch1下游基因及sVEGFR3的影响更为显著，对淋巴管生成的影响也更明显;.阻断CXCR4或Notch1均可以抑制小鼠Lewis肺癌肿瘤的生长、降低肿瘤组织内的淋巴管密度。同时阻断CXCR4和Notch1对小鼠Lewis肺癌肿瘤的生长和淋巴管密度的影响更显著。..结论.CXCR4既可直接调控Notch1及其下游基因的表达，以调节肺癌组织淋巴管新生；亦可与Notch1共同影响sVEGFR3的表达，竞争性抑制VEGFR3通路，以间接调节肺癌淋巴管新生。同时阻断CXCR4/Notch1能明显抑制肺癌的生长和肿瘤组织内的淋巴管新生，为肺癌抗淋巴管生成治疗提供了一个全新的思路。