结肠癌中多梳蛋白SUZ12与抑癌因子WNT5A相互调控的研究

结肠癌是最常见的人类恶性肿瘤之一，多梳家族(PcG)表达失调和WNT信号通路异常激活在其发生发展过程中起着重要作用。本课题旨在揭示结肠癌中PcG蛋白SUZ12与抑癌因子WNT5A之间的相互调控机制，拟研究结肠癌组织中SUZ12表达与WNT5A基因甲基化之间的相关性、在结肠癌细胞沉默SUZ12对WNT5A基因甲基化的影响和过表达 WNT5A对SUZ12基因表达的影响，同时研究S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)抑制剂通过抑制转甲基化反应而逆转SUZ12对WNT5A转录的抑制作用以及DNA去甲基化药物活化WNT5A表达以明确WNT5A通过β-catenin对SUZ12表达的调控。本课题从全新的角度探索结肠癌的发病机制，在多梳家族与WNT信号通路之间建立机制性联系，从表观遗传学角度为结肠癌寻找新的治疗靶点和药物，将是极具吸引力的研究领域。

结肠癌是最常见的人类恶性肿瘤之一，多梳家族(PcG)表达失调和WNT信号通路异常激活在其发生发展过程中起着重要作用。PcG蛋白通过形成PcG抑制复合体（PRC）发挥作用，其中PRC2包括SUZ12和EZH2等。在本课题的研究过程中，我们发现PRC2成员SUZ12在大多数结肠癌组织中的表达水平明显高于正常结肠黏膜组织，而WNT5A表达则与之相反，其在大多数结肠癌组织中的表达水平显著低于相应正常结肠黏膜组织。我们成功构建了SUZ12 shRNA真核表达载体和pEGFP-N1-WNT5A过表达载体，并转染结肠癌细胞系通过各种分子生物学技术阐明了在结肠癌细胞中沉默SUZ12可诱导E-Cadherin和WNT5A表达水平增高；过表达WNT5A可导致β-catenin和SUZ12表达水平降低。S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)抑制剂DZNep可下调结肠癌细胞中H3K27me3、SUZ12表达。DNA甲基化酶(DNMTs)抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用于结肠癌细胞显著上调WNT5A表达。另外，我们的研究还发现miRNA-101在结肠癌细胞中负调节EZH2表达，过表达miRNA-101可诱导pre-miRNA-101-1而非pre-miRNA-101-2表达，miRNA-101-1启动子荧光素酶活性可被过表达miRNA-101或者knockdown EZH2上调，而被过表达EZH2下调，提示可能存在EZH2/miR-101-1相互负反馈回路，进一步研究发现干预EZH2/miRNA-101-1反馈回路发挥抗肿瘤活性。