miR-224靶向Notch-1/Jagged-1途径介导胰腺粘液性囊腺癌细胞EMT的作用机制研究

Mucinous cystic neoplasm of pancreas is one of the most common cystic neoplasms, and the mechanism mainly remains unknown.We previously measured the system expression and screened the key miRNA associated with the tumorgenesis of MCC-miR-224. Bioinformatic analysis reveal that the process of EMT might be regulated by miR-224 through Notch-1/Jagged-1 pathway. In the present study, we will use gain- and loss- of function approaches and in vivo bioluminescence imaging to identify the role of miR-224 in the tumorigenesis of MCN and EMT transformation. We also want to clarify the relationship between miR-224 and Notch-1/Jagged-1 pathway by luciferase report system , chromatin immune coprecipitation etc. The results may add new knowledge to the mechanism of MCN pathogenesis and provide new clues for target therapy.

胰腺粘液性囊腺癌是胰腺最常见的囊性肿瘤之一，其诊治瓶颈在于恶变机制不明。课题组前期利用高通量芯片在胰腺粘液性囊腺癌中筛选差异miRNA，并锚定关键分子-miR-224。通过生物信息学分析与初步验证推测：miR-224 可能通过靶向 Notch-1/Jagged-1 介导的 EMT 过程影响肿瘤的侵袭性表型。本项目拟采用过表达和功能缺失实验，结合荧光活体成像技术，从分子、细胞和整体动物水平多方面探讨 miR-224 在胰腺粘液性囊腺癌恶变中的作用。同时通过免疫共沉淀和荧光素酶报告基因检测等方法明确 miR-224 与 Notch1/Jagged-1 途径之间的调控关系，阐明 miR-224 参与胰腺粘液性囊腺肿瘤恶变的机制。本研究有望从 miR-224 这个新视点为揭示胰腺粘液性囊腺癌的发生机制奠定理论基础，并为靶向治疗干预提供新的切入点。

胰腺黏液性囊性肿瘤起源于胰腺导管上皮细胞，是胰腺囊性肿瘤常见类型之一，在胰腺肿瘤中比较少见，恶变机制不明，有学者认为胰腺黏液性囊腺癌起源于胰腺导管上皮细胞，亦有学者认为胰腺黏液性囊腺癌是由黏液性囊腺瘤恶变发展而来。miRNA可能成为肿瘤治疗的新靶点。miR-224-5p的表达具有组织特异性和时空特异性，其涉及肿瘤发生、演进等几乎所有环节。我们课题组前期对MCN各阶段病变组织、囊液和血清miRNA 分别进行差异基因筛选，并通过qPCR 验证锚定关键分子miR-224-5p，但是，有关 miR-224-5p对胰腺黏液性囊腺癌细胞生物学功能影响及作用机制尚不清楚。本项目发现自噬在人胰腺黏液性囊腺癌组织和MCC1细胞中高度活化。高度活化的自噬可以以时间依赖性方式显著提高MCC1细胞中miR-224-5p的表达，且miR-224-5p通过靶向BCL2促进MCC1细胞自噬。提示自噬与miR-224-5p之间存在正反馈环，促进MCC1细胞迁移和侵袭。同时研究了miR-224-5p对胰腺黏液性囊腺癌细胞的生物学功能的作用及机制，即miR-224-5p在MCC-1细胞中高表达，靶向抑制PTEN表达，促进MCC-1细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化的作用。本研究是首次评估自噬在胰腺黏液性囊腺癌中作用的研究，丰富了胰腺粘液性囊腺癌发生发展机制的分子生物学理论，并且从细胞水平到动物水平，最后到分子水平，利用多种实验方法证实miR-224-5p具有促进胰腺黏液性囊腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化的过程，在胰腺黏液性囊腺癌中扮演着癌基因的角色，并阐明了其发挥作用的靶点为PTEN基因，从miRNA的角度分析了miR-224-5p与胰腺黏液性囊腺癌的关系，给胰腺粘液性囊腺癌这一临床罕见肿瘤提供了更多的基础研究数据和理论基础，希望能够给胰腺黏液性囊腺癌的靶向治疗和精准治疗带来突破。项目资助发表核心期刊文章6篇，SCI论文4篇。该项目直接培养硕士研究生1名、博士研究生1名及博士后1名，并均已经取得相应硕士和博士学位及博士后顺利出站。