丹酚酸A、B、C分子药对配伍对肾纤维化过程中PDGF-C/PDGFR-α信号途径的干预作用

Savia miltiorrhiza and herbal decoction which contain it had been widely used in clinical chronic renal disease prevention practice,and its traditional hebal medchine effect depend on its water-solube components.Applicant's previous National Natural Science Foundation subject found that Salvianolic total acid has fabulous anti-fibrosis potential. Salvianolic acid A, B, C, is an important component of salvianolic acids.Respective resisting renal fibrosis study was confined to single herbal medchine component which could't reflect the mutiple pathways、multiple targets、multiple compnents comprehensive effect of Savia miltiorrhiza.Accordingly, our research group chose Salvianolic acid A、B、C compose molecular compatibility according to proportion.To adopt unique ureteral obstruction animal models in vivo and renal tubular epithelial cell culture methods in vitro investigate the intervention effect of Salvianolic Acid A、Salvianolic Acid B、Salvianolic Acid C components compatibilty on (PDGF-C/PDGFR-α)signaling pathway from the whole、organ、cell、molecule levels,and inhibition ability for proinflammatory cytokines and regulation ability for cell apotosis relevant proteins.It will supply theory and experimental evidences for clinical usage of water-soluble components Salvianolic Acid A、B、C coorperation in preventing renal fibrosis.It will help reveal efficacy material basis of Savia miltiorrhiza water decoction and water decoction which contain Savia miltiorrhiza in preventing renal fibrosis.At the same time,it will supply a new insight into delaying chronic renal disease of herbal medchine compotents molecular compatibilty.

丹参及含丹参的中药水煎剂在防治慢性肾脏病的临床实践中被广泛应用，且其传统中医药疗效主要与丹参水溶性活性成分有关，申请人上一个国家自然科学基金研究发现丹参总酚酸有很好的抗肾纤维化疗效，丹酚酸A、B、C是丹参总酚酸的重要组分之一，既往局限于单一组分各自抗肾纤维化研究，难以客观反映丹参多途径、多靶点、多成分的综合效应。据此，课题组选择丹酚酸A、B、C并按比例组成分子药对，采用体内单侧输尿管梗阻（UUO）模型和体外肾小管上皮细胞培养相结合的实验方法，从整体、器官、细胞、分子四个水平研究丹酚酸A、B、C分子药对配伍对血小板源生长因子-C/血小板源生长因子-α受体(PDGF-C/PDGFR-α)信号途径的干预作用，对炎性细胞趋化因子的抑制作用和细胞凋亡相关蛋白的调节作用，将有助于揭示含丹参类水煎剂防治肾纤维化的药效物质基础，为建立中药分子药对配伍延缓慢性肾脏病提供新思路。

背景及方向：新近研究发现： PDGF-C/PDGFR-α信号途径在肾间质纤维化进程中起着重要作用,组织型纤溶酶原激活物(tPA)和纤维蛋白溶酶可激活PDGF-C/PDGFR-α信号途径。通过抑制PDGF-C/PDGFR-α信号途径及炎性细胞趋化因子的生成是防治肾纤维化新途径之一。迄今未发现中药组分配伍干预PDGF-C/PDGFR-α信号途径的相关文献报道。 研究表明：丹参是一种中药研究的模式生物，可以作为其他中药研究的参照和样板，因此，选择中药丹参水溶性活性成分中结构相似的丹参酚酸A、B、C组分进行分子药对配伍，深入研究其干预PDGF-C/PDGFR-α信号途径作用及抗肾纤维化的分子机制，是中药组分配伍研究的深化和发展。. 主要内容： 采用体内UUO大鼠模型和体外肾小管上皮细胞培养相结合的实验方法，从核酸和蛋白两个水平研究PDGF-C/PDGFR-α信号途径、 CCL2、CCL3、CCL5等炎性细胞趋化因子以及GRP78和内质网应激相关蛋白CHOP 等在肾纤维化中的作用及丹参酚酸A、B、C组分配伍干预作用。. 研究结果：动物实验发现，丹酚酸A、B药对、B、C药对和A、C药对，均可一定程度保护UUO大鼠肾脏组织及改善小管功能、减轻间质纤维化程度，其中丹酚酸A、B配伍可降低大鼠肾组织PDGFR-αmRNA和PDGF-C蛋白的相对表达，其效果优于丹酚酸A和B组； B、C配伍可抑制肾纤维化过程中ColⅠ、Col Ⅲ、α-SMA及CCL2的表达，优于丹酚酸C组;丹酚酸A、C配伍在抑制Caspase-3、CXCL10表达方面，优于丹酚酸C组，在抑制肾组织FN、NOX4、GRP78、CCL5表达及肾小管间质细胞凋亡，优于丹酚酸A组。体外研究发现： 丹酚酸A、B药对、B、C药对和A、C药对，均可一定程度上抑制HSA诱导的HK-2细胞PDGF-C, PDGFR-α的表达，下调CCL2及CCL3、GRP78、CHOP、Caspase-3和Caspase-12等表达，有效增加SOD, GSH的含量及减少MDA含量，从而干预PDGF-C/PDGFR-α信号途径，抑制炎性细胞趋化因子和细胞凋亡相关蛋白，从而对HSA诱导的HK-2细胞起到保护作用。科学意义：该研究为临床应用丹参酚酸A、B、C防治肾纤维化提供实验依据，为研究单味中药内有效组分配伍应用防治慢性肾脏病提供新的思路。