碘对促甲状腺激素（TSHβ）剪接体表达影响的实验研究

TSHβ剪接体（ TSHβ splice variant），是最新发现（2009.1）的TSHβ截短型蛋白，由TSHβ基因第4内含子的一部分和第5外显子编码区组成，缺失外显子4，在骨髓、脾、甲状腺和垂体中表达，功能还不十分清楚。碘营养失衡不但造成甲状腺功能异常，还影响免疫系统，与自身免疫性甲状腺疾病（AITD）发病有关，但其发生机理一直不清。TSHβ剪接体的发现为碘与甲状腺疾病的深入研究提供了新思路。本课题首先检测血清中有无TSHβ剪接体蛋白存在，了解它的作用方式；观察碘缺乏所至的甲状腺功能低下对它表达的影响，探讨它在维持甲状腺激素水平中的作用和机制；研究碘过量诱发的自身免疫性甲状腺炎与TSHβ剪接体表达变化的关系，明确它在AITD发病中的病理学作用。研究结果可为碘缺乏病和因摄碘过量而诱发的AITD的防治提供理论基础。这项工作对解释神经-内分泌-免疫网络复杂的调控机制也有重要的学术价值。

TSHβ剪接变体（ TSHβ splice variant ，TSHβ-v），是2009年发现的功能性TSHβ截短型蛋白，在骨髓、甲状腺和垂体等组织中表达，病毒感染时甲状腺中TSHβ-v mRNA表达增加7倍，而天然型TSHβ mRNA表达无改变，其生物学功能还不十分清楚。.本课题通过制备碘缺乏小鼠模型，检测TSH剪接变体在骨髓、PBL、甲状腺及垂体中的表达情况，观察碘营养失衡所致的甲状腺功异常对这一新TSHβ-v表达的影响，探讨免疫系统来源的TSHβ-v在维持甲状腺自稳态中的作用，结果显示长期碘缺乏导致甲状腺中TSHβ-v mRNA的表达下调，低碘饲养6个月时，低碘组TSHβ-v mRNA相对表达量仅为对照组的0.21倍，提示TSHβ-v可能抑制甲状腺激素的合成与分泌，而垂体中天然型TSHβmRNA相对表达量明显上调，血清甲状腺激素水平明显下降，TSH升高，仍以经典的HPT轴调节为主。利用甲状腺球蛋白（TG）免疫和碘过量诱发NOD鼠甲状腺炎，检测甲状腺中TSHβ-v表达变化，结果显示碘过量诱发甲状腺炎动物甲状腺中的TSHβ-v表达量是对照组的2倍以上，而TG免疫诱发甲状腺炎动物则表现为骨髓TSHβ-v表达量升高，表明碘过量诱发的甲状腺炎是以细胞免疫为主的炎症，迁移至甲状腺的分泌TSHβ-v的骨髓细胞增加，其炎症反应和组织破坏程度较TG免疫更为严重。通过对人血清样品进行盐析、透析和浓缩预处理，免疫沉淀法最终鉴定出血清中存在TSHβ-v蛋白，表明血清中的TSHβ-v可能与天然型TSHβ相似具有内分泌激素作用。分别建立能稳定表达TSHβ-v和TSH的CHO细胞系，共培养后取培养上清，经免疫共沉淀法证实TSHβ-v能与TSH形成二聚体，这对于证明它的稳定性和是否具有生物活性至关重要，TSHβ-v能以二聚体的形式存在于外周血循环或靶器官，是其发挥生理病理调控作用的必要物质保证。我们检测了自身免疫性甲状腺疾(AITD)病人外周血白细胞中TSHβ-v表达变化，结果表明桥本氏甲状腺炎患者TSHβ-v的表达增高，提示TSHβ-v可能参与了炎症过程中免疫－神经内分泌系统交互作用。.研究结果为研究免疫系统来源的TSHβ-v调节甲状腺功能的作用和机制提供了重要的实验依据，对解释神经-内分泌-免疫网络复杂的调控机制有重要的学术价值。