丹参注射液及其有效活性成份配伍配比对血管外膜成纤维细胞作用机制的研究

Salvia miltiorrhiza as single medicine use active as the "Siwu" effect, Component ratio of which is relatively fixed, the modern science and technology has been isolated and proved its active components / ingredients, but the compatibility proportion and integration function and their mechanism of the effective active components has not yet entirely clear. this project is based on our previous observation of Danshen and its water soluble active ingredients be able to inhibit proliferation, migration and differentiation of vascular adventitia fibroblast of, further exploration of the compatibility proportion and their role mechanism of Salvia miltiorrhiza injection and its four water soluble components (Danshensu, salvianolic acid A, salvianolic acid B and protocatechuic aldehyde) on adventitial fibroblast and hypertensive rat model. looking for the compatibility proportion rule and the ratio of the best compatibility of Danshen four water soluble effective components on the prevention and treatment of cardiovascular diseases,by using uniform and orthogonal design formula to divide into groups and composition, screening the best compatibility proportion In the hypertensive rats and AngII induced cell pathologic model, observe the role target and integration mechanism of the best compatibility proportion in the AngII-NADPH-TGFβ-ERK-ET1-CollI signal pathway, illuminate the effective component interaction and law of compatibility proportion, in the overall level of, tissue, cell and molecule, to promote the theoretical innovation of traditional Chinese medical compatibility, and provide theoretical basis for clinical use of Chinese medicine scientific, standardized and improve the curative effect.

丹参作为单方用药有功同"四物"的功效, 其中的组份比例是相对固定的，现代科技手段已经分离并证明其有效活性组分/成份, 但其有效活性组分/成份配伍配比关系、整合作用及机制尚未完全清楚，本项目是在前期观察丹参及其水溶性有效活性成份能抑制血管外膜成纤维细胞增殖、迁移和分化的基础上，进一步研究丹参注射液及其四个水溶性成份（丹参素、丹酚酸A,B和原儿茶醛）的配伍配比对血管外膜成纤维细胞和高血压大鼠模型的作用机制，寻找丹参四个水溶性有效成份配伍配比规律和防治心血管疾病的最佳配伍和配比，运用均匀和正交设计分组组方，在高血压大鼠模型和AngII所致的细胞病理模型中,筛选最佳配伍配比，观察最佳配伍配比在AngII-NADPH-TGFβ-ERK-ET1-CollI路径上的作用靶点和作用机制,在整体、组织、细胞和分子水平阐明有效成分相互作用及其配伍配比的规律，推进配伍理论创新，为中医临床用药的标准化提供依据。

丹参作为单方用药有功同"四物"的功效, 其中的组份比例是相对固定的，现代技术手段已经分离并证明其水溶性有效成份, 但其有效成分配伍配比关系及作用机制尚未完全清楚。本课题研究丹参四个主要水溶性有效成份（丹参素、丹酚酸A,B和原儿茶醛）的配伍配比对自发性高血压大鼠（SHR）模型的作用机制，寻找该四个水溶性有效成份配伍配比规律和最佳配伍和配比，运用均匀和正交设计对丹参四个主要水溶性有效成份分组，在SHR模型和细胞模型中,筛选最佳配伍配比，观察最佳配伍配比在抗氧化路径上的作用靶点和机制,在整体、组织、细胞和分子水平阐明丹参素、丹酚酸A,B和原儿茶醛相互作用及配伍配比的规律，推进中医方剂配伍理论创新，为中医临床用药的标准化提供依据。结果显示：通过观察丹参四种水溶性有效成分对血管外膜成纤维细胞的影响，确定四种水溶性成分的有效作用浓度和最佳作用浓度，丹参素( S)、丹酚酸A、丹酚酸B和原儿茶醛(L)的最佳作用浓度分别为：10-3mol/L、10-3mol/L、10-3mol/L、10-2mol/L。采用均匀设计和正交设计联用的方法，明确了其最佳作用浓度的最佳配伍浓度分别为S：1.5×10-4 ， A：7×10-6 ， B：3×10-4 ，L：5×10-4 mol/L。其最佳配伍作用于细胞的浓度和比例为S：A：B：L是150：7：300：500。最终推出四个组分作用于动物实验的浓度和比例，按以下计量给动物用药： (S: 5 , A: 0.233, B: 10, L: 17 mg/kg/d)，S:A:B:L是5:0.233:10:17。将最佳配伍配比组合（SABP）干预SHR模型，发现SABP降压效果显著，形态学显示胸主动脉内皮细胞未脱落,无血细胞粘附,平滑肌细胞增生不明显,弹性纤维较SHR组排列有序, NOX4, ROS, TGF-β1,Col-I, ET-1, α-SMA的表达明显降低，而Smad7的表达量显著增加，主动脉MT、VT/VA以及AT显著降低，与西药培哚普利的作用效果相似，实验证实SABP可以降低SHR大鼠的血压；改善血管壁的重构；增加血管的弹性和顺应性；减少血管的氧化应激反应；是通过以下途径：1、减少NOX4的表达进而减少ROS的生成。2、负性调节TGF-β通路，从而减少成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化，减少细胞外基质的合成，保护血管壁。