基于血管外膜信号途径探讨丹参水溶性有效成分最佳配伍对心血管相关疾病的作用及其机制研究

In the previous work, the compatibility ratio of four Aqueous Active Components (DSS, SAA, SAB, PAL) of Salvia Miltiorrhiza was studied based on the vascular adventitial signaling pathway by using the modern pharmacology method of uniform design and orthogonal design. The best combination of compatibility named SABP was found to have a significant antihypertensive effect on spontaneously hypertensive rats (SHR). The results reveal that change the proportion of natural chemical composition in single Chinese herbal medicine or change the proportion of components of traditional Chinese medicine, which could obtain the best effect and discover the new role. In this study, SHR was used as models to observe the effect and mechanism of SABP on cardiovascular-related diseases. To explore the effect of SABP on anti-oxidative stress, inhibition of vascular inflammation, fibrosis formation and vascular remodeling, increased vascular elasticity, reduced blood pressure and effects and its regulatory role in a series of signaling molecules, signaling pathways and crosstalk that are stimulated during the oxidative stress of the adventitia of the whole, cellular and molecular levels. To find the therapeutic target and its multi- target treatment effects of SABP in vascular cell signaling network. To elucidate the molecular mechanism of the best combination of compatibility of four Aqueous Active Components of Salvia Miltiorrhiza lowering blood pressure.

在前期工作中，采用均匀设计和正交设计联用的现代药理学方法，基于血管外膜信号途径，对丹参四种水溶性有效成分（DSS, SAA, SAB, PAL）进行配伍配比研究，筛选出最佳配伍组合并命名为SABP，研究发现：SABP对自发性高血压大鼠（SHR）具有显著的降压作用，研究结果揭示：改变单味中药中天然化学成分的比例或改变中药的组分比例，可获得最佳作用效果和发现新作用。本课题以SHR为模型，观察SABP对心血管相关疾病的作用和作用机制，探索SABP的抗氧化应激、抑制血管炎症反应、抑制纤维化形成、抑制血管重塑和降低血压的作用，及其在整体、细胞和分子水平对血管外膜始发的氧化应激过程中相关信号分子 、信号路径和串话的调控作用，寻找SABP在血管细胞信号网络中的治疗靶点及其多靶点的治疗作用，阐明SABP降血压作用的细胞分子机制。

研究背景：在以前的研究中，我们依据现代药理学方法，运用均匀和正交设计对丹参四个主要水溶性有效成份分组研究，在细胞模型中, 观察对血管外膜成纤维细胞增殖及抗氧化路径的作用，筛选其最佳配伍配比，寻找其四个水溶性有效成份的配伍配比规律，结果其最佳浓度和比例为S:A:B:L=5:0.2:10:17，把该组合命名为SABP，研究发现SABP对SHR具有显著的降压作用，这种降压作用是通过SABP抗氧化应激实现的。本课题以SHR为模型，从整体、细胞和分子水平进一步探讨SABP降血压的机制及SABP的作用靶点和作用路径。实验内容及结果：在整体水平，观察各组大鼠胸主动脉病理形态改变，SHR组胸主动脉管壁明显变厚，中层和外层直径明显增加，细胞排列紊乱，经SABP治疗后血管壁厚度变薄接近正常血管厚度。透射电镜观察血管线粒体结构发现，SHR组线粒体肿胀，线粒体嵴断裂或消失和空泡化，经SABP治疗后，线粒体嵴断裂明显减少，大部分结构恢复完整。通过免疫组织化学和印迹技术，检测了血管壁超氧化物自由基、炎性分子和血管纤维化的因子，发现SHR组ROS, Nox1, Nox2和Nox4的表达明显增多，经SABP治疗后显著降低，SHR组TLR4，NF-kB 和 IL-6的表达明显增多，经SABP治疗后炎性分子指标显著降低；SHR组TGF-β1 , COLL-1 和 CTGF的表达明显增多，经SABP治疗后血管壁纤维化指标显著降低。观察各组大鼠肾脏纤维化变化，发现SHR组TGF-β1 , Smads 和COLL-1明显升高，经SABP治疗后纤维化指标显著降低，在细胞水平,SABP显著抑制SHR胸主动脉血管外膜成纤维细胞的增殖和迁移，在氧化应激、炎性分子和纤维化指标方面，SABP的干预结果与整体动物水平基本一致。结论：高血压是一种血管炎性病变，血管的炎性改变直接导致血管重塑，血管纤维化形成，损害血管的功能，在高血压早期，血管炎性变化就已经发生，而且，这种炎性变化最早发生在血管的外膜。SABP显著降低了血管氧化应激水平，减少了氧自由基对血管的损伤，消除血管壁炎症，减少细胞外基质的合成，抑制血管纤维化形成，改善血管重塑，增加血管的弹性，发挥其降血压作用。