葛花枳椇子配伍防治大鼠慢性酒精性肝损伤的量-时-效关系研究及机制探讨

The Flos Puerariae often used by compatibling with seeds of Hovenia dulcis Thunb in the ancient time.Previous studies have shown that the Flos Puerariae and seeds of Hovenia dulcis Thunb have good function of hangover and antioxidant effect.Preliminary work shows that the liver in the rats with alcoholic liver injury will have fatty degeneration and infiltration of inflammatory cells.Detection indicators from the previous experiments, such as liver function indicators, the ethanol concentration in the blood, liver alcohol dehydrogenase activity and liver pathological form ,we can know that the group of 2:1 has the best effect.Therefore, this project intends to study alcoholic fatty liver and hepatitis, though vivo and vitro experiments,from the two angles of compatibility dose and dose cycle,we will explore the dose-time-effects and mechanism of compatibility Flos puerariae and seeds of Hovenia dulcis Thunb in alcoholic liver disease rat.In order to explain best compatibility condition of Flos puerariae and seeds of Hovenia dulcis Thunb，and further through the "alcohol-endotoxin-kupffer cell-TNFα-liver inflammation- apoptosis"pathway and lipid metabolism pathway to reveal the Effect and action mechanism of alcoholic liver disease(ALD by Flos puerariae and seeds of Hovenia dulcis Thunb.We hope that this project could provid reference for clinicians who will use Flos puerariae and seeds of Hovenia dulcis Thunb to treat alcoholic liver disease and elucidate the mechanism of hangover hangover of Flos puerariae and seeds of Hovenia dulcis Thunb.

葛花与枳椇子是古代解酒方中常相须配伍使用的两味解酒专药，研究表明二者具有较好的解酒、抗氧化作用。前期工作显示，酒精性肝损伤大鼠肝组织出现脂肪变性及炎症浸润，葛花枳椇子2:1配伍解酒保肝的作用优于单味药的疗效，能够降低血脂含量，对肝组织炎症及脂肪变性的病理变化均有改善作用。因此，本课题拟以酒精性脂肪肝和肝炎为研究对象，通过在体、离体实验相结合，从配伍剂量，给药周期两个角度，探讨葛花枳椇子配伍的量-时-效关系，阐明葛花枳椇子最佳配伍条件，并进一步通过 "酒精－内毒素－kupffer细胞－TNFα-肝脏炎症-细胞凋亡途径"以及脂质代谢途径，揭示葛花、枳椇子配伍后对酒精性脂肪肝和酒精性肝炎的影响及作用机制，以期为临床医师应用葛花枳椇子防治酒精性肝损伤提供借鉴，为阐明葛花枳椇子解酒保肝的作用机制提供依据。

本课题采用白酒灌胃复制慢性酒精性肝损伤动物模型，拟探讨不同剂量葛花枳椇子2:1比例配伍后解酒保肝的量-时-效关系，明确葛花枳椇子配伍使用的最佳条件；并通过检测肝功、乙醇代谢及“酒精-内毒素-Kupffer细胞-TNFα-肝脏炎症-肝细胞凋亡”的途径中各细胞因子（包括内毒素、TNFα、IL-1、IL-6、INF-γ等）的变化以及酒精所致肝细胞凋亡的变化，深入揭示葛花枳椇子2:1配伍对慢性酒精性肝损伤的防治作用及机制，为阐明葛花枳椇子解酒保肝的作用靶点及途径提供依据。采用的方法是Wistar大鼠随机分成六组：空白组、酒精组、东宝肝泰组、配伍低剂量（生药3g/kg）+酒精组、配伍中剂量（生药6g/kg）+酒精组、配伍高剂量（生药12g/kg）+酒精组。空白组给予0.5%CMC，酒精组给予白酒灌胃，配伍各剂量+酒精组每日上午先给予相应浓度的药液（10ml/kg），下午给予白酒灌胃，于实验的第4周、8周、12周末末次给药后称重，然后每组随机选取8只大鼠禁食12小时，次日用水合氯醛麻醉，取材，检测指标。综合分析实验结果，得出以下结论：①在时间方面，葛花枳椇子配伍各剂量组给药4周对慢性酒精性肝损伤没有治疗作用。给药第8周和12周，配伍各剂量组显示出一定的治疗作用，可以不同程度地改善相关指标，尤其在直接反映酒精性肝损伤的指标如AST、ALT、ALP、TP、ALB和病理方面，低剂量组较中高剂量组效果好；第8周和12周，在反映酒精代谢相关指标如ADH活性和血中乙醇浓度方面，配伍低剂量组显示出药效最优。②在反映酒精性肝损伤相关机制方面，造模给药的第4周、8周和12周，葛花枳椇子配伍高剂量组较空白组大鼠肝中caspase-3浓度降低，对Caspase-3活性具有一定的抑制作用，对改善酒精导致的“内毒素－Kupffer细胞－TNFα—肝脏炎症”途径中各细胞因子包括内毒素、TNFα、IL-1、IL-6、INF-γ等方面具有一定趋势，但这种改善的趋势不是很明显。③葛花枳椇子配伍各剂量对海马神经递质的影响：葛花枳椇子配伍中剂量有较明显的升高NE的作用；葛花枳椇子配伍各剂量组对5-HT均具有改善趋势，以高剂量组效果更为明显；葛花与枳椇子配伍中剂量对DA含量有改善作用，葛花枳椇子配伍高剂量对其代谢产物DOPAC和HVA有降低趋势，但与模型组比较不具有统计学差异。此部分属于超额完成部分。