Ⅱ型胶原特异性CD8+T细胞在RA发病机制中的作用研究

类风湿关节炎（RA）是抗原驱动的、自身反应性T细胞介导的自身免疫病，传统认为自身抗原特异性CD4+T细胞在RA发病中起重要作用。近来研究显示，CD8+T细胞在RA的致病过程中似乎具有"双刃剑"作用。但其是否具有抗原特异性，以及与RA有何关联，尚不明确。鉴于CⅡ是RA主要的自身抗原，本课题拟从免疫识别研究入手，分析RA患者关节滑液内是否存在特异性识别CⅡ的CD8+T细胞，并通过生物信息学、细胞与分子免疫学手段对CⅡ中CTL表位进行精确作图，然后应用Pentamer示踪以及多色流式分析技术实时动态研究RA发病不同阶段CⅡ特异性CD8+T细胞的频率、表型及功能。通过本研究拟阐明RA自身抗原特异性CD8+T细胞的免疫识别机制及免疫"双刃剑"作用，及其与RA发生、发展及转归的关系，为RA免疫发病机制作出重要补充，并为基于自身反应性CD8+T细胞的RA特异性免疫治疗手段提供理论基础和实验依据。

项目完成情况：1、在RA 主要自身抗原CIIHLA-A*0201限制性CD8+T细胞表位的鉴定工作中,完成了：（1）直接免疫荧光法检测各候选肽与HLA-A2分子的亲和力。我们应用流式细胞术检测各表位候选肽与HLA-A2分子的结合情况，选取OVA257-64作为阴性对照，阳性对照采用HLA-A2限制性HIVpol476-484，每组设置三个复孔。亲和力分析流式结果见图2，各肽与HLA-A2分子结合荧光强度（fluorescence intensity 简称：FI）均值见表2，统计分析结果见表3。结果显示：候选肽P1261、P1365及P1399检测所得的荧光系数分别为1.35、2.53及1.78。提示：我们合成的5条候选肽中P1261、P1365及P1399能与HLA-A2有效结合，是潜在的CTL表位。.（2）ELISPOT检测候选肽刺激SFMC分泌IFN-γ.我们采用候选肽刺激HLA-A*0201病人的SFMC，检测IFN-γ，每组采用三个复孔。结果如图4所示：候选肽P1365刺激SFMC分泌IFN-γ的斑点数和对照相比有差异。 .2、在自身反应性CD8+T细胞的功能研究工作中，采用RA病人和CII诱导的类风湿关节炎模型，流式或者实时定量PCR方法检测自身反应性CD8+T细胞的表型（CD44/D69的表达）和功能，比如IL-17等的表达。探索自身反应性CD8+T细胞在RA发病机制中的作用研究。.取得的成果：（1）获得1个CⅡ的HLA-A*0201限制性CD8+T细胞表位。.（2）在中文核心期刊发表文章2篇，参加会议交流2次、申请专利1项、SCI论文1篇修回。