新型荧光配体的设计合成，利用荧光偏振研究活性化合物同昆虫鱼尼丁受体的亲和作用

鱼尼丁受体是新一代高效、低毒杀虫剂氟虫酰胺和氯虫酰胺的作用靶标。目前，已采用同位素标记、荧光测试钙离子浓度等方法对鱼尼丁受体与相关化合物的作用进行了大量研究，但是仍然没有阐明两类二酰胺化合物在鱼尼丁受体上亲和位点及亲和作用的差异。本项目以氯虫酰胺为活性结构合成荧光配体，以美国蜚蠊腿部的鱼尼丁受体提取物为亲和对象，借助荧光偏振技术研究荧光配体同鱼尼丁受体的实时亲和作用、研究氯虫酰胺与氟虫酰胺在鱼尼丁受体上亲和位点及亲和作用的差异、继而研究新化合物同鱼尼丁受体的亲和作用以便发现作用于鱼尼丁受体的高活性化合物。该项研究可避免使用同位素、操作简单、均相中实时完成测试化合物或配体同鱼尼丁受体相互亲和作用，是一项利用化学生物学的方法针对杀虫剂新靶标鱼尼丁受体开展的基础研究，对于新杀虫剂的发现具有重要意义。

具有独特的结构、高效的杀虫活性和良好的环境兼容特性的作用于鱼尼丁受体的新型杀虫剂，是当前农药相关研究的热点。但是， 鱼尼丁受体是一个大分子的跨膜蛋白，难以获得其三维空间结构，限制了不同结构作用于鱼尼丁受体的化合物和活性之间相互关系的研究。. 本课题提取了美国蜚蠊大腿内的鱼尼丁受体，并且通过蛋白质印迹技术确认提取物内含有鱼尼丁受体；基于活性化合物氯虫苯甲酰胺的结构，设计合成了含有端炔基的氯虫苯甲酰胺类似物，制备了的含有叠氮基的香豆素，然后通过Click反应合成得到了含有氯虫苯甲酰胺核心结构的荧光配体；通过对各种条件的探索和优化，建立了基于荧光偏振技术研究各种结构不同的化合物同鱼尼丁受体亲和的关系。利用建立的方法，发现结构相似的氯虫苯甲酰胺和氰虫苯甲酰胺作用于鱼尼丁受体上的同一位点，而氟虫双酰胺、鱼尼丁不影响氯虫苯甲酰胺荧光配体和鱼尼丁受体的亲和，明显说明两类不同结构的鱼尼丁受体杀虫剂不作用于同一位点；通过对部分新化合物的测试发现其中部分同鱼尼丁受体上氯虫苯甲酰胺的作用位点有较强的结合，而且杀虫活体筛选结果同荧光偏振结果基本一致。. 本课题的研究结果在一定程度上可以代替同位素标记技术和荧光测试钙离子的方法研究活性化合物同鱼尼丁受体的相互作用，对于相关深入研究具有重要作用，同时对于方便、快捷发现作用于鱼尼丁受体的新化合物具有重要作用。