抑制Kupffer细胞HDAC11活性诱导大鼠肝移植免疫耐受

肝脏具有免疫特惠性的重要原因是存在Kupffer细胞（KCs）等特异性免疫耐受细胞。KCs在肝移植急性排斥反应过程中扮演着即促进排斥反应、同时又诱导免疫耐受的双重角色。IL-10是KCs发挥免疫抑制效应的重要因子。如能调控KCs性IL-10在移植肝脏高效表达，将促使KCs功能向免疫抑制方向偏移而有利于免疫耐受的诱导,极具临床价值。.组蛋白去乙酰化酶11（HDAC11）是最新发现的抑制APC细胞IL-10转录的关键因子，但对其研究尚未涉及器官移植领域。鉴于KCs是体内最大的APC细胞群，本研究拟分离KCs及建立肝移植急性排斥反应动物模型，采用染色质免疫共沉淀-测序技术，RNAi沉默及基因过表达技术等方法，从表观遗传学角度深入探讨HDAC11调控IL-10转录机制；探讨以KCs的HDAC11为靶点诱导肝移植免疫耐受的可行性。以期为诱导肝移植免疫耐受的基因治疗作一些探索性工作。

我们首先建立了一种新的简单有效的kupffer 细胞（KCs）分离、纯化和培养技术，并对其进行了纯度、表型及功能鉴定，为基于KCs的细胞实验奠定了良好的基础。我们发现：LPS刺激后，与组蛋白乙酰化酶11过表达组（Ad-HDAC11）相比，经HADC11-shRNA预处理组KCs的表型重塑为M2型，其IL-10表达量明显增加，而表面共刺激分子，MHC-II的表达量及混合淋巴细胞反应能力均明显抑制。大鼠肝移植术后，供肝经HADC11-shRNA处理组的血浆IL-10表达明显升高，而IL-2，TNF-α及IFN-γ水平均明显低于Ad-HDAC11组，其排斥反应程度（肝功能及肝脏组织学损害）明显减轻，术后生存率明显提高。糖皮质激素诱导的TNF受体（GITR）及其配体（GITRL）在急性排异组大鼠KCs的表达也明显高于耐受组，地塞米松通过重塑KCs为M2型，抑制KCs细胞的GITR及GITRL的高表达，调控RelB转录因子的高表达和核移位，抑制吲哚氨2,3双加氧酶和TNF-α的表达，发挥其免疫抑制效应。此外，虽然KCs的过度激活（M1型）还是导致肝移植术后缺血再灌注损害(IRI)的主要原因之一，但KCs与肝脏切除后的肝再生密切相关，我们还发现肝细胞再生增强因子等促进肝细胞再生的因子需要通过KCs发挥其促进肝细胞再生的效应，以氯化钆预处理（KCs功能完全抑制）的小体积肝移植术后大鼠生存率并不能得到提高；而以具有细胞穿透性的核因子κB必需分子结合的小分子多肽(NBD)预处理后，将重塑KCs为M2表型，下调TNF-α表达，有效减轻大鼠肝移植术后IRI的程度。因此，本项目结果提示：在肝移植这一特殊病理环境下，诱导KCs为M2表型（而非完全抑制KCs功能），不仅有利于移植术后免疫耐受的建立而且还能减轻IRI程度；HDAC11作为负性调控IL-10表达的关键性因子，有望成为诱导免疫耐受的重要靶点。.本项目按计划完成，目前已培养1名博士、3名硕士，并已发表SCI论文4篇、CSCD核心期刊论文2篇；在此基础上，项目负责人新申请到国家自然科学基金及教育部科学技术研究重点项目各1项，2011年被评选为重庆医科大学附属第二医科大学优秀青年人才，并获得2012年国家留学基金委资助公派留学（美国）1年。