小檗碱在儿童难治性急性淋巴细胞白血病靶向治疗中的作用机制研究

化疗耐药是造成急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿死亡的重要原因。癌基因MDM2在儿童ALL中高表达，抑制ALL细胞凋亡，进而产生化疗耐药。MDM2高表达的儿童ALL治疗难度大、死亡率高、预后差，临床上属于难治性ALL。若抑制MDM2表达，则可恢复ALL细胞对凋亡敏感性。我们发现：小檗碱(BBR)可特异性抑制ALL细胞MDM2表达，通过p53依赖的MDM2功能，诱导细胞凋亡（已发表于Cancer Res）。此外，BBR作为MDM2抑制剂，还可通过p53非依赖的MDM2功能，诱导细胞凋亡。本项目设计从临床病例、ALL细胞及动物模型三个层次，采用SiRNA，Western-blot，Real-time PCR，流式细胞和激光共聚焦等技术，重点探讨BBR通过p53非依赖的MDM2-XIAP功能，诱导ALL细胞凋亡的分子机制，为BBR在临床难治性ALL靶向治疗中的作用及临床应用提供理论和实验依据。

小檗碱在体内外均表现出很强的抗肿瘤活性，但其具体分子机制目前尚不明确。该研究主要探讨小檗碱诱导急性淋巴细胞白血病凋细胞亡的p53非依赖的分子机制。方法：该研究采用p53阴性的急性淋巴细胞白血病细胞系 EU-4作为研究模型。用小檗碱处理上述细胞后，通过不同方法检测细胞活性及凋亡。Western blot 和 PCR 方法被用于检测凋亡相关蛋白XIAP和MDM2的表达。用小分子干扰(siRNA)方法敲低内源性XIAP和MDM2的表达。结果： 小檗碱在翻译水平抑制XIAP表达，导致 XIAP对caspase抑制作用解除，从而诱导ALL细胞凋亡（非p53依赖的MDM2-XIAP途径）。小檗碱能抑制XIAP蛋白表达，该作用呈出较好的时间及浓度依赖性。小檗碱通过蛋白酶体依赖途径抑制癌基因MDM2表达，及癌基因XIAP蛋白表达下降。通过小分子干扰(siRNA)方法敲低内源性XIAP表达后，可增强阿霉素对白血病细胞的凋亡诱导作用。结论：我们的研究结果揭示了小檗碱诱导白血病细胞凋亡新的p53非依赖的分子机制。小檗碱有望成为难治性p53阴性ALL治疗的靶向治疗药物。