自分泌运动因子受体在阿尔茨海默病中作用机制的初步探讨

阿尔茨海默病（Alzheimer's disease, AD）发病机制非常复杂，至今尚不清楚。本课题组发现，快速老化模型小鼠SAMP8随增龄过程学习记忆能力逐渐下降的同时大脑海马和皮层中AMFR表达有下降趋势，昆明小鼠随学习记忆的获得过程大脑海马中AMFR表达有升高趋势。提示，AMFR表达水平与学习记忆功能密切相关，AMFR可能参与了AD患者的认知功能衰退和记忆障碍，但AMFR在AD中的确切作用机制并不清楚。我们推测，AMFR可能通过泛素-蛋白酶体系统参与AD关键病理异常蛋白Tau、Aβ的降解。初步实验结果表明，AMFR能减少细胞内磷酸化Tau蛋白的表达并减少细胞分泌Aβ40和Aβ42的水平。本课题拟证明AMFR能减少磷酸化Tau蛋白或Aβ的水平，研究AMFR减少磷酸化Tau蛋白的可能作用机理，旨在探讨AMFR在AD中的可能作用机制，为AD防治药物新靶标的发现和确认提供线索和依据。

本课题旨在探讨自分泌运动因子受体（AMFR）在阿尔茨海默病（AD）中可能作用及作用机制，为AD防治药物新靶标的发现和确认提供线索和依据。本课题的研究计划包括三部分：一是在动物整体水平开展AMFR与AD关键病理分子Tau蛋白和β-淀粉样蛋白（Aβ）的相关性研究；二是在细胞水平证明AMFR能够减少磷酸化Tau蛋白的水平并探讨其作用机理；三是在细胞水平了解AMFR能否减少Aβ的水平。.根据项目执行中遇到的实际情况和问题分析，课题组对实验方案进行了以下两方面的调整：一是在原有携带FLAG标签AMFR表达载体的基础上，进一步设计、构建了携带GFP标签的AMFR全长及其胞内区和跨膜区截断体的表达载体，以更直观地了解AMFR的表达情况，并有助于进行更为深入的机理研究；二是将研究对象从SH-SY5Y细胞扩展至293T细胞，后者转染效率高，利于更快速地开展实验，获得相关实验结果。.经过三年时间的努力，本课题获得了一些有意义的结果，基本完成了任务书计划。主要研究结果包括：发现快速老化模型小鼠（SAMP8）脑内的AMFR表达随着小鼠月龄的增加呈逐渐降低趋势，磷酸化Tau蛋白水平则有增高趋势，但未发现AFMR和Tau蛋白表达存在共定位关系；在SH-SY5Y细胞和293T细胞上，证实了AMFR可以降低包括231位点和396位点磷酸化的Tau蛋白水平，且蛋白酶体抑制剂MG-132可以阻止AMFR降低磷酸化Tau蛋白的作用，提示AMFR可能通过蛋白酶体途径降解磷酸化Tau蛋白；同时发现，AMFR的上述作用可通过其胞内区片段实现，而跨膜区片段无此作用，提示可能是AMFR胞内区发挥了降低磷酸化Tau的作用；在过表达Aβ的CHO（APP/BACE1）细胞上发现，AMFR能够降低细胞内Aβ40和Aβ42的含量，提示AMFR可能会阻止细胞内Aβ的生成或分泌;在SH-SY5Y细胞上发现，转入AMFR表达载体后可以明显改善Aβ对细胞的损伤，提示AMFR能够阻止Aβ的神经损伤作用。.综上所述，本课题证明了AMFR与AD关键病理分子Tau蛋白和Aβ存在一定的相关性，AMFR可以降低磷酸化Tau蛋白水平，可以阻止Aβ的神经损伤，本课题的研究结果为进一步开展AMFR在AD中的作用及作用机制研究奠定了一定基础。