马尔尼菲青霉感染巨噬细胞释放的外来体抗原递呈及蛋白质组学研究

马尔尼菲青霉病作为一种地域性深部真菌病，多见于广西、广东，好发于艾滋病等免疫受损的患者。随着艾滋病的扩散，该病可能会突破地域性界限而成为突发性传染病，因此，开发快速诊断方法迫在眉睫。结核杆菌感染的巨噬细胞所释放的外来体具有递呈抗原，启动适应性免疫的功能，且包含结核杆菌抗原成分。前期，我们建立体外马尔尼菲青霉感染巨噬细胞模型，电镜结果显示马尔尼菲青霉存在于巨噬细胞内的多囊泡体中，而外来体来源于多囊泡体，由此，我们推测马尔尼菲青霉感染的巨噬细胞亦可释放外来体。本课题拟通过分离、鉴定马尔尼菲青霉感染的巨噬细胞释放的外来体，观察外来体对固有免疫、适应性免疫的激活作用，以明确外来体具有递呈抗原的功能；利用蛋白质组学鉴定外来体所包含马尔尼菲青霉抗原成分，明确外来体所包含抗原的生物信息，为将来开发新的诊断试剂及研制高效的免疫疫苗提供理论依据。

马尔尼菲青霉病作为一种地域性深部真菌病，多见于广西、广东，好发于艾滋病等免疫受损的患者。随着艾滋病的扩散，该病可能会突破地域性界限而成为突发性传染病，因此，开发快速诊断方法迫在眉睫。结核杆菌感染的巨噬细胞所释放的外来体具有递呈抗原，启动适应性免疫的功能，且包含结核杆菌抗原成分。前期，我们建立体外马尔尼菲青霉感染巨噬细胞模型，电镜结果显示马尔尼菲青霉存在于巨噬细胞内的多囊泡体中，而外来体来源于多囊泡体，由此，我们推测马尔尼菲青霉感染的巨噬细胞亦可释放外来体。本课题通过建立马尔尼菲青霉菌与巨噬细胞共培养体系，优化条件，确定马尔尼菲青霉菌分生孢子与培养的巨噬细胞比例为5:1，提取不同时间段上清液，通过超高速离心机离心，获取感染马尔尼菲青霉菌的巨噬细胞释放的囊泡小体，通过流式细胞术、电镜及Western Blot鉴定该囊泡小体为马尔尼菲青霉感染的巨噬细胞释放的外来体，并发现在共培养至48小时时产生的外来体的量达到最大值。结果显示真菌感染巨噬细胞后巨噬细胞亦能产生外来体，这解决了该课题的关键问题。通过对外来体进行蛋白质质谱分析，发现外来体的蛋白质中含有许多马尔尼菲青霉菌的抗原肽。这预示着感染马尔尼菲青霉病的巨噬细胞产生的外来体具有传递抗原，刺激机体产生免疫应答的功能。这为了解马尔尼菲青霉病的发病机制及将来开发新的诊断试剂提供供理论依据。