HIV感染人群中马尔尼菲青霉病诊断标志物研究

马尔尼菲青霉病是一种致死性真菌感染，80-90%发生在HIV感染人群，并呈明显上升趋势，但目前缺乏早期有效的诊断方法。本研究是前期工作的继续和深入，利用本实验室已建立的高度灵敏和特异的马尔尼菲青霉特异性Mp1p抗原和抗体检测方法对1996-2010年HIV感染病人血清进行检测，从而获取马尔尼菲青霉感染患者不同时期血清，与对照血清，经血清蛋白成分差异性比较，结合免疫血清与这些差异蛋白免疫标记，进一步用质谱分析、生物信息学分析与 cDNA 表达文库技术等有机结合，发现马尔尼菲青霉在HIV感染人群中持续高度表达并分泌到宿主体内的特异性循环抗原。通过基因克隆、重组蛋白表达、抗原性分析及蛋白特性分析进一步筛选出具有高度诊断价值的马尔尼菲青霉抗原，以此研制HIV感染人群中高度表达的马尔尼菲青霉特异性抗原，并建立相应的抗原抗体检测方法，这将为研究马尔尼菲青霉合并HIV感染患者早期诊断或发病机制奠定基础。

完成情况：马尔尼菲青霉病是HIV感染的标志性疾病，并呈明显上升趋势，但缺乏准确灵敏的诊断方法。本项目主要完成以下内容：.1、成功建立真菌感染标本信息库，为临床评价诊断方法奠定基础；.2、基因克隆、重组表达、鉴定、马尔尼菲青霉（Penicillium marneffei,PM）可持续表达的特异性循环抗原，成功建立高度灵敏、特异的PM抗原、抗体检测方法。经确诊真菌感染及正常人血清标本进一步优化，抗原检测方法灵敏度可达100%，特异度98.58%，该试剂盒正在产业化中；.3、建立针对PM 5.8S DNA的实时荧光PCR法，可检测感染标本中的PM，与其他真菌无交叉反应，但不能用于陈旧性标本中PM的检测；.4、完成广州地区HIV感染人群中PM感染的血清学监测：对广州地区2004-2011年期间HIV感染病人血清进行血清学监测，发现PM感染在HIV人群中总体患病率为：抗原阳性率：9.36%，抗体阳性率约为2.82%，二者联合检测阳性率为11.92%。采用可同时检测曲霉和PM感染的商品化GM试剂盒，进一步核实阳性检测结果：当临界值（GM指数）为0.5，1.0，1.5时，符合率分别为86.55% , 73.88%，66.67%。Logistic回归分析广州地区HIV人群感染PM感染的风险因素，发现病人处于AIDS阶段(OR=4.66,P<0.001)、湿度(OR=1.02,P=0.002)、CD4细胞低于200个/μL(OR=2.9,P=0.032)时呈明显相关性，尤其是当CD4细胞低于50个/μL时，患病率可高达28.06%，建议对该类高危人群进行常规PM抗原监测。但与病人年龄、性别、HIV传播途径、温度等无关。上述结果为对HIV人群及时预防并监测PM感染奠定基础；.5、为能同步监测上述HIV标本中最常见的机会性真菌——白念珠菌感染的情况，我们通过构建质粒、重组表达白念珠菌特异性蛋白Csa2，成功建立白念珠菌特异性抗原、抗体检测方法，并初步临床评价其应用价值。但灵敏度不够理想，尚未用于上述标本检测。 .研究成果：参加国际交流1次；发表SCI论文1篇（Clinical Microbiology and Infection, IF=5.197）、中文核心期刊4篇；授权国家发明专利1项；获国家科技重大专项子课题资助1项；参与广州市科技计划项目1项。