A20致肝癌细胞凋亡的分子机制研究及其联合靶向TNF-α的治疗效果研究

肝癌是临床上常见的恶性肿瘤，治疗效果较差，迫切需要寻找新的治疗策略。抗凋亡蛋白A20是一种具有抗细胞凋亡功能的基因，且其在肿瘤细胞中具有抗TNFα诱导的凋亡作用。本课题组前期研究发现：A20蛋白在临床肝癌标本中呈高表达，下调A20的表达可明显抑制肝癌细胞的增殖并诱导其凋亡；下调A20后可明显增强靶向TNFa的作用效果。本课题拟在此基础上，首先运用信号转导通路发现者芯片结合生物信息学技术，探讨下调A20表达致HepG2细胞凋亡的信号转导通路；然后选择可介导细胞发生凋亡的通路激动剂/抑制剂通过FCM、Tunnel等方法观察其单独及联合靶向TNFα后促HepG2细胞凋亡的效果；最后利用HepG2肝癌细胞荷瘤鼠模型评价促凋亡效果最明显的激动剂/抑制剂及其联合靶向TNFα后对肝癌细胞增殖的抑制效果。该研究结果为进一步阐明下调A20后的促凋亡机制奠定了理论基础，为肝癌的生物治疗提供新的实验依据。

A20是NF-κB信号通路的重要调控元件，通过负反馈环路抑制NF-κB信号，从而拮抗TNF-α诱导的肿瘤细胞凋亡作用，严重限制了TNF-α的临床应用和治疗效果，但目前对于A20的抗凋亡机制研究还有许多不足。因此，我们首先检测了A20在肝癌细胞系很正常肝细胞系中的表达情况，然后通过A20干涉重组腺病毒的制备，研究了A20干涉后对肝癌细胞HepG2周期和凋亡的影响，以及对A20干涉后TNF-α对肝癌细胞的杀伤效果进行了评估；接下来通过全基因组芯片和信号转导通路发现者芯片对A20干涉后的基因表达谱变化进行了检测，挑选出具有凋亡调节作用的相关靶蛋白进行了深入研究。结果显示，A20高表达于各肝癌细胞系，在正常肝细胞系中表达很低；A20干涉后显著增强了HepG2细胞的G1期阻滞和凋亡；A20干涉腺病毒将TNF-α的凋亡诱导率从9%提升至21.5%；全基因组芯片筛选发现A20干涉可促进BBC3的表达，促进肝癌细胞的G1期阻滞、凋亡，降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力；信号转导通路发现者芯片发现A20干涉可提高ATG12的表达，促进肝癌细胞的自噬。综上所述，A20在肝癌细胞中，不但可通过抑制NF-κB信号通路抑制肿瘤细胞凋亡，还可通过调节BBC3和ATG12等基因表达水平，调节肝癌细胞的凋亡和自噬，这一研究成果进一步完善A20的生物学功能研究，为促进A20相关临床治疗策略的开发提供了重要理论基础和指导意义。