利用贝类构建近海水域戊型肝炎病毒分布模型

戊型肝炎（HE）呈全球分布，近来陆续有研究证实戊型肝炎病毒（HEV）能够引起亚临床慢性感染和跨种间传播，提示其已成为新的人畜共患病病原。目前尚无有效治疗药物和防疫制剂，所以其对全球公共卫生安全的威胁已远超出人们的传统预期。戊型肝炎病毒传播途径十分复杂，特定地域、环境、气候、人畜群生活习性等因素均可能导致其感染与传播方式多样性存在。迄今，国际上关于戊型肝炎病毒在近海水域分布的研究几乎处于空白阶段。本项目研究从人类社会活动与海洋生态环境紧密相关的宏观角度出发，考虑到贝类对水环境中病毒的天然富集作用的特点，经科学布设贝类样品采集地点，采用实时定量PCR和免疫捕获PCR检测手段对其体内的戊型肝炎病毒进行示踪并结合细胞培养方法确定该病毒的感染活力比率参数，由此作为评估我国近海水域戊型肝炎病毒总体分布情况的数据模型，为我国在未来戊型肝炎立体防控理论与实践方面提供基础数据。

本研究于2012年受到国家自然基金委资助开始启动，目前已经按合同书预定的内容完成了相关研究。在本研究中，本课题组按计划完成了三省一市七大采样区共计13个采样点的戊型肝炎病毒（HEV）分布调查工作。在13个采样区中有７个地区的贝类中检测出HEV阳性，其中渤海北部辽东湾沿岸的４个采样区均有HEV阳性检出。本次调查总采样量约126kg，平均每公斤贝类HEV总污染率达17.5%，若以贝类平均个体计算HEV污染率约为0.2%左右与国外相关研究结果相近。若以每公不同贝类种类计算，其中泥蚶、红蚶以及杂色蚶的HEV污染率分别14.3%、28.2%和11.5%。分离获得了13株HEV基因片断并提交至GenBank(登录号：KJ816335-47)。遗传进化分析表明所有新分离株的基因均为HEV基因4型，与人和猪源HEV亲源关系相近并且可继续划分成G4b、G4d以及一个未知亚型群组。该研究结果表明在环渤海沿海水域环境中存在着多种HEV亚型同时传播，而且HEV污染来源很可能与沿每内陆地区人和猪有关。A549细胞感染实验结果表明所获得13株HEV毒液无感染活力，即HEV感染活力比率参数为 0%。这一结果提示污染贝类的HEV不具备感染风险，其对公共卫生安全的危害极其有限。但是，由于HEV本身具有不易培养的特性且本研究所使用的细胞株仅为A549一种，考虑到细胞培养环境与人或动物体内环境有着极大不同，因此，保守起见，我们目前无法排除所分离到的HEV仍具感染其它人或动物的可能，其风险不宜忽略。. 在完成上述研究内容同时，根据研究和实际应用需要课题组还完成了多种HEV检测方法的建立，如实时荧光定量RT-PCR和RT-LAMP等检测方法的建立。制备了HEV假病毒颗粒用作阳性对照品，制备了乳酸菌展示HEV结构蛋白的活载体菌株。总之，以上研究成果为今后进行广泛的HEV分子流行病学调查以及防控工作奠定了坚实基础。