miR-146a遗传多态性与冠心病遗传易感性及其机制研究

冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）是严重威胁人类健康的重要慢性炎症性疾病。人类MicroRNA 146a（MiR-146a）与炎症密切相关，可调控肿瘤坏死因子受体相关因子6等与动脉粥样硬化（AS）发生发展密切相关的基因的表达，且其基因位点存在功能性单核苷酸多态性（SNP）rs2910164。本项目将在确证冠心病患者外周血单核细胞MiR-146a表达升高的基础上，通过病例-对照研究,查明rs2910164多态性与冠心病易感性的关系及其对血清TNF-alfa和IL-5水平的影响；进而在培养的外周血单核细胞研究该SNP对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的单核细胞活化的影响，并通过报告基因实验对miR-146a新的靶基因进行确定。本项目研究将有助于阐明miR-146a在冠心病发病机制中的作用，查明MiR-146a SNP与冠心病易感性的关系，为冠心病及其他AS相关疾病的防治提供新的思路。

通过收集中国人群冠心病、缺血性脑梗死和慢性心衰患者标本，研究了miR-146a功能性SNP rs2910164(G/C)对这些疾病易感性的影响及其机制。发现冠心病、充血性心力衰竭和缺血性脑卒中患者中rs2910164位点GG基因型频率均显著高于健康对照人群（P分别为0.033、<0.0001和0.036）；稳定型心绞痛患者外周血单个核细胞（PBMC）中miR-146a的表达显著下降（p<0.05），而急性心梗患者PBMC中miR-146a表达有升高的趋势，携带rs2910164 G等位患者PBMC中miR-146a表达升高（p=0.099）；而与rs2910164 CC基因型健康个体相比，基因型为rs2910164 CC的冠心病患者血浆中IL-5的浓度显著下降（p<0.05），而TNF-α的水平显著升高（p<0.05）；10 ng/mL TNF-和100 mg/L ox-LDL可分别显著升高和降低健康志愿者来源的PBMC中pre-miR-146a的水平（p<0.05）。生物信息学分析，发现TRAF2、LTB、CD40LG、TNFIP8、EPHX2和NOX4均为miR-146a的靶基因；报告基因分析发现miR-146a可下调包含NOX4和EPHX2 3-UTR区miR-146a识别序列的报告基因活性，且miR-146a下调含EPHX2 3-UTR区序列报告基因活性的作用受其识别序列附近呈完全连锁不平衡的SNP rs1042032和rs1042064的影响；伴有高脂血症的缺血性脑卒中患者中rs1042032 AA基因型频率显著升高（40.8%和31.4%，p=0.007）；缺血性脑卒中患者中miR-146a 和EPHX2两个多态位点均为非风险基因型的频率（48.1%）显著低于对照人群（54.5%，P=0.007），提示两个基因的SNP间可能存在协同作用，共同影响缺血性脑卒中的发生；急性缺血性心/脑血管疾病（急性脑卒中+急性心肌梗死）患者PBMC中miR-146a与EPHX2 mRNA表达间呈正相关（r=0.423，p=0.002）；在原代培养的人脐静脉内皮细胞，miR-146a与EPHX2 mRNA表达水平间也呈显著正相关（r=0.503，p=0.028），但过表达miR-146a不影响培养的HUVEC细胞株中EPHX2 mRNA和蛋白表达。