傣药榼藤子皂苷类成分抗肿瘤的活性及其分子机理研究

本项目以傣药榼藤子为研究对象，在继承传统理论和用药实践的基础上，结合已有的实地调研及文献考证结果，研究榼藤子皂苷类成分抗消化系统肿瘤的作用及其作用机理。拟从榼藤子中提取分离、水解得到皂苷、次生苷及苷元；筛选出具有抗肿瘤作用的活性成分，探讨其构效关系；研究其活性化合物抗肿瘤的作用机制；构建榼藤子皂苷类成分抗肿瘤靶点的生物网络（通路），确定对榼藤子皂苷敏感细胞信号途径以及关键蛋白。从而为傣医治疗肿瘤科学化、实用化和系统化提供范例，并为进一步开发出具有自主知识产权的新型药物奠定基础。因此，该课题不仅在理论上具有显著的学术意义，而且具有重要的应用价值。

利用现代分离技术，从榼藤子乙醇提取物中分离得到25个化合物，鉴定了其中20个化合物的结构，包括4个榼藤酰胺类，3个倍半萜类，8个芳香苷类，9个三萜皂苷类化合物, 特别是含有7个糖分子的齐墩果烷型三萜皂苷。其中9个为新化合物。.利用大孔树脂对榼藤子总皂苷（TSEP）进行富集与纯化，以榼藤子皂苷Rheediinosede B作为含量测定的指标，建立了TSEP的含量测定方法。从榼藤子总皂苷的酸水解产物中共分离得到1个次生皂苷和5个原生苷元，其中5个为未见报道的新化合物。.对从榼藤子中提取得到的皂苷及次生苷元和苷元进行体外抗肿瘤活性筛选，发现2个三萜皂苷具有很好的抗肿瘤活性。而其它皂苷、苷元及次生苷元抗肿瘤的活性很弱。并且具有相同苷元的皂苷也因为糖链结构的差异呈现出不同的抗肿瘤活性。.进一步研究表明Phaseoloideside E （PE）能够诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡，其PE诱导凋亡可能与Bax、Bcl-2蛋白的表达水平变化紧密相关。PE诱导Ec-109细胞凋亡可能通过降低细胞内GSH含量，导致ROS蓄积或Bcl-2蛋白家族的变化致使MPTP开放，线粒体膜通透性增加，线粒体膜电位降低，从而导致线粒体中促凋亡因子如Cyt-c，AIF等的释放，激活Caspase-9，Caspase-9再进一步激活Caspase-3，从而产生了Caspase自我放大级联反应，进而裂解DNA损伤细胞，从而诱导Ec-109细胞发生凋亡。.通过采用高脂饲料喂养并结合注射小剂量STZ的方法建立T2DM大鼠模型。分别灌胃给予（25 mg.kg-1、50 mg.kg-1和100 mg.kg-1）的TSEP。TSEP各给药剂量均具有良好的降血糖活性，呈现出明显的量效关系。TSEP可降低血清中TC、TG、FFA和LDL-C的含量并增加HDL-C的含量。其机理可能是提高AMPK磷酸化水平来参与对体内的脂代谢调节，以及改善T2DM大鼠氧化应激和微炎症状态。.课题组通过检测与脂肪变性相关的TC和TG值，以肝细胞受损的敏感指标 AST、ALT值来考察皂苷水解产物对HepG-2细胞胰岛素抵抗模型中脂质代谢紊乱和肝损害的影响。结果发现Entagenic acid能明显降低胰岛素抵抗HepG-2细胞中TC、TG、AST、ALT值。表明Entagenic acid能改善软脂酸诱导的HepG-2细胞胰岛素抵抗。