内毒素结合肽的体外定向进化及其活性研究

针对内毒素血症的防治，以现有对内毒素作用环节机制的认识结合传统基因工程手段迄今尚未找到一种理想的阻断剂。本研究采用噬菌体展示肽库筛选能与LPS结合的多肽并结合数据库分析以验证已知的内毒素作用环节并可能预测到新的作用靶点。进而探索应用DNA改组技术对获取的片段进行重组突变并构建二级文库，从内毒素结合肽改组文库中筛选LPS亲和力强的克隆，对其表达纯化或者多肽合成并进行生物学活性测定。对获得的改组体测DNA序列并推导其全长氨基酸序列，结合生物信息学手段对改组基因序列分析及改组蛋白结构分析，同多种属的内毒素结合蛋白如LBP、BPI等进行比较寻找关键的功能结合位点。经计算机三维模拟分析，寻找它们之间的高度保守区，了解其中编码与LPS结合的氨基酸序列。通过多轮体外定向进化筛出选全新的具有拮抗功能的内毒素结合肽，为内毒素血症的机理和防治研究提供有价值的探索。